جداسازی سلولهای بنیادی مغز استخوان رت و تمایز آن به سلول های عضلانی

مهندسی بافت ترکیبی از سلول و داربست سه بعدی جهت ترمیم بافت آسیب دیده یا از بین رفته ی ماهیچه است. در این راستا, نانو داربست های کامپوزیت نانولوله های کربنی و کایتوزان و هیدرکسی آپاتیت، نانولوله های کربنی و کایتوزان و داربست کایتوزان با روش freeze dryingتهیه شد. داربست های تهیه شده، از لحاظ خصوصیات سطحی، درصد تخلخل، اندازه ی منافذ، نحوه ی توزیع منافذ، رفتار تخریب پذیریو ترکیب تشکیل دهنده ی داربست ها مورد بررسی و مقایسه قرار گرفتند. مطالعات میکروسکوپ الکترونی نگاره نشان دهنده ی خصوصیات سطحی مناسبی داربست ها بود. تخلخل سنجی براساس قانونارشمیدوس بیانگر تخلخل بالای90% در هر سه داربست بود. طی تست تخریب پذیری تحت تیمار با بافر pbs، مشخص شد که داربست های کامپوزیت حاوی hap از سرعت تخریب وخاصیت جذب آب بیشتری برخوردار است. بررسی زیست سازگاری داربست ها به وسیله آزمون mtt نشان داد که داربست های کامپوزیت حاوی hap سطوح بهتری را برای رشد و تکثیر سلول ها فراهم می آورند. سلول های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان رت و جوجه استخراج و خالص سازی شد. به منظور اثبات بنیادی بودن سلول های جدا شده از مغز استخوان رت، سلول ها از لحاظ بیان ژن های بنیادی sox2 و nanog با روش rt-pcr بررسی شدند. سلول های جداسازی شده از مغز استخوان ژن های بنیادی را بیان کردند. سلول های بنیادی مزانشیمی رت برروی داربست های cnt/chitosan/hap,chitosan/hap,cnt/chitosan,chitosan کشت داده شدند. سلول های بنیادی به تنهایی و نیز داربست ها حاوی این سلول ها به مدت 30 روز تحت تیمار القا کننده های عضله از قبیل آزاسیتیدین، عصاره قلب قرار گرفتند. در نهایت به منظور بررسی توان تمایزی سلول ها در سطح داربست ها، روند تمایز با رنگ آمیزی h&e بررسی شد و بیان ژن های تمایزی desmin،myod،?-actinin از طریق rt-pcr ارزیابی شد. و جهت بررسی مورفولوژی سلول های تمایز یافته بر روی داربست ها، تصاویر میکروسکوپ الکترونی تهیه و مقایسه گردید.