بهینه سازی حذف آلبومین سرم با استفاده از سیستم حلال

مطالعه در زمینه پروتئوم انسانی جهت تشخیص بیومارکرهای بیماری¬ها به دلیل پتانسیل دارو¬ سازی بسیار مورد توجه است. بسیاری از این پروتئین¬ها غلظت کمی در پلاسما دارند و به همین دلیل آشکار کردن و شناسایی آن¬ها سخت است. این تکنولوژی به دلیل وجود پروتئین¬های پرحجمی نظیر آلبومین و ایمونوگلبولین محدود شده است چرا که این پروتئین¬های سنگین باعث پوشیده شدن و یا کاهش حساسیت آشکارسازی بسیاری از پروتئین¬های کوچک با غلظت پایین می¬شوند. علاوه بر این الگوی وسیع پراکندگی این دو پروتئین روی ژل¬های دو بعدی الکتروفورز باعث دشواری تشخیص پروتئین¬های با ph ایزوالکترویک و یا وزن مولکولی مشابه می¬شود. در میان پروتئین¬هایی که بیشترین فراوانی را دارند، آلبومین، ترنسفرین، ایمونوگلوبین، 85% کل پروتئین¬ها را تشکیل می¬دهند. اما از آنجا که pi زنجیره سنگین lgg بالای بازه متداول pi مورد استفاده در الکتروفورز دو بعدی است، مشکل اصلی در تشخیص بیومارکرها، وجود آلبومین است. لذا یافتن روشی مناسب برای حذف آلبومین همواره مورد توجه بوده است. روشی که اولا، آلبومین را به صورت اختصاصی و بدون حذف پروتئین¬های همراهش برداشت کند؛ ثانیا، آلبومین را با راندمان بالا و به صورت کارآمد حذف کند؛ ثالثا، مقرون به صرفه و به کارگیری آن آسان باشد تا در آزمایشگاه¬های تشخیص طبی به سهولت بتوان از آن استفاده کرد. به نظر می¬رسد روشی که چن(chen) و همکارانش بر مبنای رسوبدهی با 10% tca در استون مطرح کردند می¬تواند تا حد زیادی موارد بالا را تامین کند، اما با اینکه حذف آلبومین بر مبنای استفاده از 10% tca در استون روش مناسبی به نظر می¬رسد اما هنوز مقداری آلبومین را باقی می¬گذارد. در این پایان نامه سعی شد که با گزارش کردن پارامترهای جدیدی شامل امگا و دلتا توضیح تئورتیکی برای روش¬های رسوبدهی مبتنی بر tca در حلال آلی ارائه شود و با توجه به آن، تلاش¬هایی در زمینه بهبود این روش بر مبنای بعضی خصوصیات فیزیکوشیمیایی منحصر به فرد آلبومین، قطبیت حلال، دفعات رسوبدهی، دما و درصد¬های مختلفی ازtca انجام شد و در نهایت چهار حجم از حلال آلی اتانول همراه با 20% tcaبه عنوان نقطه¬ی اپتیمم که در آن حذف آلبومین در حداکثر مقدار ممکن است معرفی گردید. برای دستیابی به اهداف مدنظر این تحقیق ، از روش¬ها و نرم افزار¬های متنوعی شامل الکتروفورز یک بعدی، نرم افزار phoretix 1d، design expert و... استفاده گردیده است.