تخلیص و بررسی بعضی از خصوصیات پروتئین شبه هیستونی hu در باکتری hallobacillus litoralis

پروتئین شبه هیستونی hu، پروتئین بازی، دایمر و حفاظت شده ای است که نقش مهمی در بیان، ترمیم، نوترکیبی و همانندسازی dna و فشردگی در نوکلئوئید dna باکتری ها ایفا می کند. هدف این پژوهش اصلاح روش خالص سازی پروتئین hu بود. زیرا سرعت در تخلیص پروتئین ها بسیار حائز اهمیت است و یافتن راه هایی برای کوتاه کردن مسیرهای تخلیص پروتئین ارزشمند می باشد زیرا در طی فرآیند تخلیص ساختار پروتئین دستخوش تغییراتی می گردد که گاهی از ارزش مطالعاتی آن می کاهد. برای این منظور باکتری halobacillus litoralis در محیط کشت نوترینت براث حاوی 10درصد نمک سدیم کلرید و 5/0درصد نمک منیزیم سولفات کشت داده و بیومس در فاز لگاریتمی رشد جمع آوری شد. سپس بدون نیاز به سانتریفوژ با دور بالا پروتئین hu استخراج گردید و پروتئین مورد مطالعه در ژل الکتروفورز دناتوره ناپیوسته15% حرکتی مشابه پروتئین hbsu hu)باکتری bacillus subtilis) داشت و با استفاده از روش ایمونوبلات و آنتی سرم پلی کلونالmono specific علیه پروتئین hbsu که توسط elisa تیتر آن سنجیده شده بود مشخص گردید که این پروتئین از لحاظ ایمونولوژیکی شبیه hbsu است. در ادامه با استفاده از آنتی سرم اختصاصی hbsuستون کروماتوگرافی تمایلی با بستر cnbr-activated sepharose 4b تهیه گردید و پروتئین مزبور خالص شد. سپس پدیده ی پلیمریزه شدن این پروتئین در روش های مختلف تخلیص با ایمونوبلاتینگ وبا بافرهای نمونه مختلف در زمان های انکوباسیون و درجه حرارت متفاوت در هنگام الکتروفورز دناتوره ناپیوسته، مورد بررسی قرار گرفت. همچنین با استفاده از پرایمرهای طراحی شده برای ژن hbs باکتری bacillus subtilis قطعه ای در حدود bp 320 ا در این باکتری تکثیر شد که از لحاظ طول قطعه مشابه ژن این پروتئین در bacillus subtilis بود. نهایتا مشخص شد که باکتری halobacillus litoralis دارای پروتئینی است که از لحاظ وزن ملکولی و ایمونوشیمی مشابه hbsu است بدون نیاز به سانتریفوژ دور بالا و salting out این پروتئین توسط ستون کروماتوگرافی تمایلی cnbr-activated sepharose 4b در یک مرحله خالص گردید.