ایمنی زایی، حساسیت و اختصاصیت پروتئین گیرنده کمپلکس سیدروفور-فریک (baua) در اسینتوباکتر بومانی

جنس acinetobacter در خانواده moraxellaceae طبقه بندی می شود. در این جنس کوکوباسیل هایی شدیدا هوازی، گرم منفی، غیرمتحرک، اکسیداز منفی، کاتالاز مثبت و غیرتخمیری قرار می گیرند. بیش از 30 گونه ی ژنومی در این جنس شناسایی شده که از این بین 17 تای آن ها نام های شناخته شده و معتبری دارند.acinetobacter baumannii یک پاتوژن مهم است که هم اکنون بعنوان عامل عفونت های بیمارستانی مثل عفونت های جریان خون، پنومونی وابسته به دستگاه تهویه و عفونت های زخمی، بخصوص در بیماران بحرانی که در بخش مراقبت های ویژه (icu) بستری شده اند شناخته می شود. این باکتری برای ایجاد عفونت در میزبان پرسلولی نیاز به آهن دارد که به شدت به وسیله میزبان محدود می شود. در شرایط هوازی باکتری برای غلبه بر این مشکل، انواع لیگاندهای آهن با وزن ملکولی کم به نام سیدروفور تولید و به محیط خارج سلولی ترشح می کنند که با گرایش زیاد به آهن فریک متصل می شوند و تشکیل کمپلکس فریک- سیدروفور را می دهند.baua (baumannii acinetobactin utilization) با وزن ملکولی در طیف 88-75 کیلودالتون یکی از مهم ترین پروتئین های غشای خارجی این باکتری برای جذب آهن است. آنتی بادی مونوکلونال علیه پروتئین های غشای خارجی تنظیم شونده به وسیله آهن (iromps) مانع از جذب آهن توسط این پاتوژن شده و باکتریسیدال می باشد. در صورتی که بتوان مانع از جذب آهن توسط این باکتری شد، می توان میزبان را در برابر تهاجم این باکتری ایمن نمود. در این مطالعه تاثیر ایمنی زایی و نیز اختصاصیت و حساسیت پروتئین نوترکیب غشایی baua علیه باکتریacinetobacter baumannii مورد بررسی قرار می گیرد.به منظور تهیه پروتئین نوترکیب baua، پس از کشت باکتریacinetobacter baumannii ، ژنوم آن تخلیص شد. با کمک واکنش زنجیره پلی مراز ژن baua از اسینتوباکتر بومانی به طول 2083 جفت باز فراوان سازی و پس از ایجاد برش در دو انتهای آن بوسیله ی آنزیم های محدود کننده ی مناسب، روی ناقل بیانی pet28a کلون شد. پس از انتقال سازه نوترکیب به میزبان اشرشیاکلی bl21de3، بیان پروتئین مورد نظر توسط غلظت های مختلف ایزوپروپیل تیو بتا- دی گالاکتوزید (iptg) القاء و بهینه سازی آن انجام شد. نتایج بیان با sds-page بررسی و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون ni-nta تخلیص شد. در نهایت پروتئین نوترکیب با وزن مولکولی 75 کیلودالتون به موش-های balb/c تزریق و پس از تکمیل دوره ایمن سازی، تیتر آنتی بادی با سنجش الایزا مورد ارزیابی قرار گرفت.تزریق این پروتئین به موش های balb/c نشان دهنده توان بالای آن در تحریک سیستم ایمنی و تولید آنتی بادی است. تست الایزا نشان داد که آنتی بادی تولید شده در شناسایی پروتین اتصالی فریک انتروباکتین قدرت بالایی دارد و موش های ایمن در مواجهه با 1010 باکتری زنده از خود مقاومت نشان دادند. لذا می توان از این پروتئین به عنوان کاندیدی مناسب برای تهیه واکسن علیه acinetobacter baumannii استفاده کرد.