بیان و تعیین خصوصیات آنزیم aacel9a

سلولاز در صنعت به عنوان آنزیمی بسیار پرکاربرد و گران قیمت محسوب می شود. کاربرد آن در صنایع غذایی، نساجی، سوخت و همچنین صنعت داروئی باعث شده اهمیت بسیاری از محققین به سمت این آنزیم معطوف شود. یکی از کاربردهای با ارزش این آنزیم استفاده از آن در تجزیه ی فراوان ترین ماده ی قابل تجزیه در طبیعت یعنی سلولز است. از واحد های گلوکز حاصل از تجزیه ی سلولز، می توان در تولید بیو اتانل بهره برد. با این حال هنوز شرایط بهینه ی فعالیت سولاز در صنعت از تعریف دقیق و منسجمی برخوردار نیست. همین امر باعث شده که نیاز به این آنزیم به واسطه ی درست مصرف نکردن آن بیشتر شود. زیرا که در نتیجه ی مشخص نبودن شرایط بهینه ی فعالیت و پایداری آنزیم، مقداری زیادی از آنزیم غیر فعال و از بین می رود. در این تحقیق پلازمید حاوی ژن aacel9a به باکتری ecoli سوش top10 منتقل و بعد مورد تعیین توالی قرار گرفت. سپس پلازمید استخراج و به باکتری بیانیbl21 ecoli جهت بیان منتقل گردید. پروتئین aacel9a با روشهای ستون تمایلی نیکل-آگارز (ni-nta) و شوک حرارتی تخلیص و توسط ژل sds-page به نمایش گذاشته شد. بررسی فعالیت آنزیم توسط سنجش برنفیلد انجام گرفت و بعد از تایید فعال بودن آنزیم، غلظت آن تعیین و پارامترهای سینتیکی محاسبه گردید. در محاسبات سینتیکی km،0/2 % سوبسترای cmc و vmax، 250 واحد آنزیمی بدست آمد. مطالعه فعالیت آنزیم در حضور یونهای ca+2، co+2 و zn+2 و شوینده ی sds انجام و همچنین پایداری دمایی آنزیم در حضور یونهای ca+2 و co+2 مورد تحقیق قرار گرفت. مطالعات نشان می دهد که آنزیم در حضور یون کلسیم پایدارتر خواهد شد و در حضور یون کبالت فعالتر می شود. استفاده از یون روی بر فعالیت آنزیم منجر به کاهش میزان فعالیت گردید. در نهایت از روش رویه سطح پاسخ (rsm) برای تعریف شرایط بهینه ی فعالیت آنزیم استفاده شد. مدل به دست آمده پیشنهاد می دهد که آنزیم در دمایc °64/5، غلظت(mm) 4/92 کلسیم و ph برابر 6/35 بهترین بازده ی فعالیت را دارد که با مقایسه با نتایج آزمایشگاهی همبستگی قابل قبولی (93 %) نشان می دهد.