خالص سازی آلبومین سرم انسانی و مطالعه برهم کنش آن با آمارانت به عنوان یک افزودنی غذایی سنتزی

در این پایان نامه، برهم کنش آمارانت و آلبومین سرم انسانی (hsa) توسط روش های اسپکتروفوتومتری فرابنفش- مرئی، فلوئوریمتری ذاتی و خارجی و دو رنگ نمایی دورانی (cd) در بافر 50 میلی مولار سدیم سیترات 4/7ph مورد مطالعه قرار گرفت و به منظور بررسی بیشتر، تکنیک شبیه سازی دینامیک مولکولی نیز مورد استفاده قرار گرفت. در حضور آمارانت، فلوئورسانس ذاتی hsa به طور چشمگیر و منظم کاهش یافت که نشان دهنده وجود تریپتوفان در و یا نزدیکی جایگاه اتصال آمارانت در hsa است. آنالیز داده های پیوندی در چهار دمای مختلف بر اساس معادله اشترن- ولمر نشان داد که آمارانت نشر فلوئورسانس ذاتی hsa را به وسیله مکانسیم خاموش کنندگی استاتیک خاموش می کند. تعداد جایگاه های اتصال و ثابت اتصال به کمک نمودار اشترن- ولمر تغییر یافته محاسبه گردید. مقادیر نشان داد ثابت اتصال با افزایش دما کاهش می یابد که نشان دهنده ناپایدار شدن کمپلکس آمارانت-hsa در دماهای بالاتر بود. علاوه بر این مقادیر تقریبا برابر 1 بود که بیانگر وجود یک جایگاه اتصال برای آمارانت در hsa می باشد. مقادیر منفی آنتالپی ( kj mol?162/21-) و مثبت آنتروپی ( j mol?1k?109/30) آشکار کرد که میان کنش بین آمارانت و hsa به وسیله پیوندهای آب گریز و هیدروژنی انجام شده است. بر طبق تئوری فارستر فاصله بین دهنده (تریپتوفان پروتئین) و پذیرنده (آمارانت)، ، اندازه گیری شد که معادل 68/3 نانومتر بود. این فاصله به وضوح نشان دهنده احتمال بالای انتقال انرژی از پروتئین به رنگ می باشد. حدود 40 % کاهش آب گریزی سطحی پروتئین در اثر اتصال آمارانت نیز مشاهده شد و این مشاهده ممکن است نشان دهنده فشرده شدن ساختار hsa در اثر اتصال آمارانت باشد. نتایج مطالعات cd پیشنهاد می کند که واکنش بین hsa و آمارانت باعث کاهش محتوای ساختار ?-هلیکس پروتئین به میزان 6% شده است. علاوه بر این، مطالعات شبیه سازی دینامیک مولکولی نشان داد که اتصال آمارانت به hsa در زیر دُمین iia (جایگاه i سادلو) روی داده است و این مشاهده آزمایش های نشانگرهای رقابتی جایگاه را نیز تایید می کند.