بررسی بیان ژن مانوپروتئین 65 کیلودالتونی کاندیدا آلبیکنس جدا شده از نمونه های کلینیکی و تعیین پاتوژنسیته در موش balb/c

سابقه و هدف: عفونت های قارچی مهاجم به عنوان یک مشکل اساسی در سلامت عمومی گزارش می شود به ویژه کاندیدیازیس سیستمیک که موجب افزایش مرگ و میر در افراد با نقص ایمنی از قبیل بیماران ایدزی و نوتروپنیک تحت شیمی درمانی یا پیوند مغز استخوان می شود. تشخیص اولیه کاندیدیازیس سیستمیک اغلب مشکل است در نتیجه درمان موثر اغلب با تاخیر شروع می شود. بنا براین استفاده از روش های pcr جهت کاهش زمان تشخیص عفونت های قارچی با کاهش مرگ و میر بیماری منتشره مرتبط می باشد.ژن مانوپروتئین 65 کیلودالتونی کاندیدا آلبیکنس کاندید مناسبی برای تشخیص می باشد. این ژن یک بتاگلوکوناز را کد می کند که یک نقش اصلی در ارتباط با مرفوژنز و پاتوژنیسیتی میزبان بازی می کند. هدف از این مطالعه شناسایی گونه های متفاوت کاندیدا (آلبیکنس، گلابراتا، پاراپسیلوزیس) با استفاده از تکنیک pcr و همچنین بررسی بیان ژن مانوپروتئین 65 کیلودالتونی کاندیدا آلبیکنس جدا شده از نمونه های کلینیکی و تعیین پاتوژنسیته در موش balb/c می باشد. مواد و روش ها: بر روی 107 نمونه مخمری آزمایش های کشت در محیط کورن میل آگار حاوی توئین 80، تولید لوله زایا در محیط سرم،کشت در محیط کروم آگار همچنین تست های جذب قندی با استفاده از کیت api 20 c aux (biomerieux, france) برای شناسایی انواع مختلف کاندیدا انجام شد. آزمایش pcr با استفاده از پرایمرهای اختصاصی گونه برای ژن مانوپروتئین 65 کیلودالتونی بر روی تمام نمونه ها انجام شد. خلوص rna با اسپکتروفتومتر تعیین گردید و میزان برابری از rna(1 میکروگرم) برای ساخت cdna طبق روش کیت maxime rt premix (intron) مورد استفاده قرار گرفت.1/0 میلی لیتر از سوسپانسیون pbs حاوی106× 5 سلول کاندیدا آلبیکنس به صورت تزریق داخل وریدی از طریق ورید دمی به موش های ماده سالمbalb/c در دو گروه 10 تایی انجام شد.جهت ارزیابی میزان بیان ژن mp65 در مخمر کاندیدا آلبیکنس از تکنیک qreal-time rt-pcr استفاده گردید. برای بررسی بیان نسبی ژن های mp65 و act1از فرمول 2-??ct استفاده شد و نتایج با آزمون non-parametric wilcoxon در نرم افزار spss version 16.0 آنالیز گردید. یافته ها: با استفاده از روش های کشت وتست های بیوشیمیایی100مورد نمونه کاندیدا آلبیکنس،6 مورد کاندیدا گلابراتا و1 مورد کاندیدا پاراپسیلوزیس جدا شده از نمونه های کلینیکی شناسایی شدند.آزمایش pcr با پرایمرهای اختصاصی گونه بر روی نمونه های کلینیکی انجام شد که در همه موارد یک باند با طول قطعه مورد انتظار برای کاندیدا آلبیکنس، گلابراتا و پاراپسیلوزیس (bp475، bp361، bp124) به ترتیب به دست آمد و با همه موارد گونه های تشخیص داده شده با روش کشت مطابقت داشت.با توجه به نتایج حاصله از آنالیز 2-??ct، میزان بیان نسبی ژن mp65 کاندیدا آلبیکنس بعد از تزریق به موش بطور معناداری نسبت به قبل از تزریق افزایش یافته است (p < 0.05). نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که روش pcr با بکارگیری پرایمرهای اختصاصی گونه کاندیدا جهت شناسایی گونه های کاندیدا روشی قابل تکرار،سریع واختصاصی است.میزان بیان ژن mp65 مخمر کاندیدا آلبیکنس بعد از تزریق به موش3/ 2 برابر افزایش یافت.این نتایج نشان می دهد افزایش بیان ژن mp65 ممکن است مراحل اولیه به سمت تهاجمی شدن باشد که نیاز به مطالعات بیشتری دارد.