انتقال ژن گاما توکوفرول متیل ترانسفراز به گیاه کلزا

ویتامین ها ترکیبات آلی هستند که نقشی حیاتی در زندگی موجودات ایفا می کنند. شناسایی ویتامین ها چندان به عقب باز نمی گردد. از جمله این ویتامین ها، ویتامین e است. ویتامینی محلول در چربی، دارای خاصیت آنتی اکسیدانتی که تنها در گیاهان سنتز می گردد. این ویتامین شامل چندین ایزوفرم است، که این ایزوفروم ها به دو گروه توکوفرول و توکوترینول تقسیم می شوند که هر کدام 4 ایزوفروم آلفا، بتا، گاما و دلتا را شامل می شود که آلفا توکوفرول فعال ترین ایزوفروم این گروه است. دیگر ایزوفروم ها حالت پیش ساز دارند و توانایی تبدیل شدن به آلفا توکوفرول را دارند. یکی از این ایزوفروم ها گاما توکوفرول است که توسط آنزیم گاما توکوفرول متیل ترانسفراز توانایی تبدیل شدن به آلفا توکوفرول را دارد. ژن مربوط به این آنزیم قبلا از گیاه گوجه فرنگی استخراج و به فاژمید pbluscript منتقل شده و مورد استفاده قرار گرفت. این ژن با استفاده از آغازگرهای تخصصی و به وسیله روش pcr از روی فاژمید pbluscript تکثیر شد. سپس محصول pcr و ناقل بیانی pbi121 توسط آنزیم xbai برش داده شد و ژن tmt –? توسط آنزیم t4 لیگاز و در طی واکنش اتصال به ناقل pbi121 منتقل گردید. در مرحله بعد به سلول های مستعد e. coli منتقل شد. بعد ازآزمایش با pcr و هضم، ناقل بیانی حاوی ژن tmt -? به آگروباکتریوم تومیفاشینس منتقل شد و به روش مالونی به کوتیلدون (برگ های لپه) گیاه کلزا انتقال یافت. بعد از وارد نمودن ژن مراحل القا، ساقه زایی و ریشه زایی در گیاه صورت پذیرفت و نمونه هایی که در محیط حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین و سفوتاکسیم توانایی رشد را داشتند، جهت بررسی آزمون تراریخت شدن از نمونه های گیاهی dna استخراج و با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، pcr گردید و در نهایت ویتامین e استخراج و توسط اسپکتوفتومتر اندازه گیری شد.