شناسایی ویروسنیوکاسلبااستفادهاز روش haemadsorption- rt-pcr در مدفوع نمونه های کلینیکی مشکوک به نیوکاسل ولوژنیک ویسروتروپیک

پایان نامه
چکیده

بیماری نیوکاسل یکی از مهمترین بیماری های طیور می باشد که همه ی گونه های پرندگان را درگیر می کند. برای تشخیص این بیماری روش های زیادی در دسترس می باشد, علاوه بر جداسازی ویروس به عنوان استاندارد طلایی در تشخیص این بیماری, روش های تشخیص مولکولی نیز تست هایی قابل اطمینان اند. ممکن است بعد از بهبودی از بیماری گاهی تامدتها دفع ویروس رخ دهد. برای ردیابی ویروس در محیط اطراف مرغ های مادر, هچری, مزارع گوشتی و تخم گذار و تعیین حضور ویروس در مدفوع پرندگان زینتی و غیر زینتی موجود در قفس , بناچار نیازمند روشی برای تغلیظ ویروس باهدف جداسازی و تشخیص می باشیم. این مطالعه بگونه ای طراحی شد که با استفاده از رهیافتی جدید بر اساس یک حقیقت بیولوژیکی پذیرفته شده یعنی پدیده ی همادزورپشن ویروس نیوکاسل تغلیظ گردد. برای افزایش حساسیت تست rt-pcr از نمونه های مدفوع و محیطی به عنوان یک تکنیک غیر تهاجمی تصمیم گرفته شد برای تغلیظ ویروس از تست همادزورپشن استفاده گردد. طی سال 2013 میلادی (1391-1392 شمسی) از 50 گله ی گوشتی ارجاعی به بیمارستان تخصصی طیور ماد با علائم بالینی بیماری نیوکاسل , نمونه های بافتی و مدفوع اخذ گردید.نمونه های مغز, طحال و سکال تانسیل 4 جوجه از هر گله بصورت استریل اخذ گردید و مخلوط گشت. همزمان با نمونه های بافتی, نمونه های مدفوع همان جوجه ها جمع آوری و برای هر گله جداگانه مخلوط گردید. استخراج rna و تست rt-pcrمستقیما بر روی نمونه ای مدفوع و بافتی انجام گرفت. همچنین مقداری از نمو.نه های مدفوع نیز در فرایند همادزورپشن وارد گردیدند و مورد استخراج rna و تست rt-pcr قرار گرفتند. در تمام مراحل کار سعی شد از تخریب و آلودگی rna استخراج شده اجتناب شود. بخاطر شیوع گسترده ی نیوکاسل ولوژنیک در منطقه یک جفت پرایمر یونیورسال برپایه ی توالی های بدست آمده از مطالعات قبلی طراحی گردید و در این تست استفاده گردید.محصول rt-pcr با اندازه ی 384 جفت باز در 38 مورد از 50 نمونه ی بافتی تشخیص داده شد. در نمونه های مدفوعی که مستقیما مورد استخراج rna قرار گرفتند 18 مورددر تست rt-pcr مثبت گردیدند. در نهایت در نمونه های مدفوعی که مورد همادزورپشن قرار گرفته بودند 24 مورد از 50 نمونه ی مورد تست مثبت شدند. مجموعا در نمونه های بافتی , مدفوع و نمونه های مدفوع جذب شده باخون به ترتیب 76%, 36% و 68% بیماری نیوکاسل تشخیص داده شد. نتایج نشان داد که در تشخیص مولکولی و شاید جداسازی ویروس از نمونه های محیطی و مدفوع تغلیظ ویروس بوسیله ی فرایند همادزورپشن امکانپذیر است.

منابع مشابه

مقایسه حساسیت دو روش RT-PCR و RRT-PCR برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل در طیور

زمینه مطالعه: بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماریهای ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. هدف: با توجه به اینکه روش‌های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، انجام این مطالعه به منظور استفاده از تکنولوژی‌های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می‌باشد. روش کار: استخراج RNA با استفاده از کیت RNease mini و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. RNA استخراج شده ...

متن کامل

شناسایی عوامل نوکاردیوزیس در نمونه های شستشوی برونش(BAL) بیماران مشکوک به سل مراجعه کننده به بیمارستان های تهران به روش PCR

Background : Identification of Nocardia spp. in routine medical laboratories is based on phenotypic methods that is often time- consuming. The objective of this study was to diagnose Nocardia agents by PCR technique in BAL samples of patients with suspected tuberculosis admitted to hospitals in Tehran. Materials and Methods: In this study, 116 BAL samples of patients admitted in Baqiyatallah, I...

متن کامل

تشخیص مولکولی رئو ویروسهای طیور با روشهای Nested/RT-PCR در نمونه های بافتی حاصل از گله های مشکوک به بیماری در برخی استانهای کشور

رئو ویروسها در سالیان اخیر بعنوان عامل طیف وسیعی از عفونتها و بیماریها در ماکیان باعث خسارات شدید اقتصادی در صنعت پرورش طیور بوده اند.با توجه به شیوع وگسترش عفونتهای رئو ویروسی و وجود یافته های بالینی و سرولوژی ، حضور آلودگی به این ویروسها در مزارع پرورش طیور کشورمان قطعی به نظر می رسد. نظر به حساسیت ،سرعت و دقت بالای روشهای مولکولی در تشخیص عوامل عفونی مختلف هدف این تحقیق راه اندازی و بهینه سا...

متن کامل

مقایسه حساسیت دو روش rt-pcr و rrt-pcr برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل در طیور

زمینه مطالعه: بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماریهای ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. هدف: با توجه به اینکه روش های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، انجام این مطالعه به منظور استفاده از تکنولوژی های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می باشد. روش کار: استخراج rna با استفاده از کیت rnease mini و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. rna استخراج شده ...

متن کامل

جداسازی و شناسایی آسپرژیلوس فومیگاتوس در نمونه های لاواژ برونکوآلوئولار (bal) مشکوک به سل به روش nested-pcr

زمینه و اهداف: آسپرژیلوس فومیگاتوس عامل بیش از 90% آسپرژیلوزیس مهاجم حاد ریوی است. هدف از مطالعه حاضر شناسایی و ردیابی آسپرژیلوس فومیگاتوس در نمونه های لاواژ برونکوآلوئولار (bal) مشکوک به سل به روش nested-pcr است. مواد و روش کار: در این بررسی، در طی 9 ماه در طول سال های 92-91 تعداد 100 نمونه bal از بیماران بستری و مراجعه کننده به بیمارستان آموزشی در شمال تهران جمع آوری گردید، آزمایش مستقیم، کشت...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده دامپزشکی

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023