بیان ژن کپسید پروتئینی ویروس موزاییک زردی کدوی فرنگی در باکتریescherichia coli و خالص سازی پروتئین به منظور تهیه پادتن نوترکیب و نانومتریال

ویروس موزاییک زرد کدو zucchini yellow mosaic virus (zymv) مترادف muskmelon yellow stunt virus ، عضو جنس potyvirus از خانواده potyviridaeبوده و اولین بار در سال1973از ایتالیا گزارش شده است(2). در ایران این ویروس اولین بار در سال 1367 از تهران گزارش شد. این ویروس از اکثر مناطق جهان گزارش شده و از بیماری های مهم از روی خیار در منطقه حوزه دریای مدیترانه می-باشد. دامنه میزبانی آن خانواده های aizoaceae، amaranthaceae(تاج خروس)، chenopodiaceae(اسفناجیان)، compositae(مرکبان)، cucurbitaceae(کدوییان)، labiatae(نعناییان)، leguminosae(حبوبات)، ranunculaceae(آلالگان)، scrophulariaceae(گل میمون)، solanaceae(سیب زمینی) وumbelliferacae (گل جعفری) می باشد. علایم بیماری شامل موزاییک، زردی، کوتولگی، تغییر شکل میوه ها و دانه ها در کدو، تیل، خیار و هندوانه می باشد.zymv از طریق چند ین گونه شته از جمله شته سبز هلو به طریق ناپایا منتقل می شود و در کدو به صورت بذر زاد قابل انتقال میباشد. ذرات zymv به صورت رشته های انعطاف پذیر به طول 750 نانومتر است که حاوی rna تک رشته ای مثبت می باشد. هدف از این تحقیق بیان ژن کامل کپسید پروتئینی این ویروس در سیستم پروکاریوتیک باکتری escherichia coli می بود. با توجه به اینکه خالص سازی ویروس نیازمند امکانات گسترده مانند سانتریفوژهای با سرعت بالا و التراسانتریفوژ می باشد که در اغلب آزمایشگاه های کشور وجود ندارد، تولید آنتی بادی های نوترکیب با استفاده از پروتئین پوششی نوترکیب می تواند این مشکل را مرتفع سازد. بیان ژن کپسید پروتئینی ویروس باعث ایجاد ذرات شبه ویروسی در باکتری میگردد که این پیکره های تو خالی به عنوان نانو متریال مورد استفاده قرار میگیرد. بنابرین با بیان ژن کپسید ویروس موزاییک کدوی فرنگی زمینه برای استفاده از آن به عنوان ماده نانو در آینده فراهم خواهد شد. به همین منظور، ژن پروتئین پوششی ویروس مورد نظر با استفاده از آغازگرهای اختصاصی در آزمون pcr تکثیر داده شد. برای تهیه ی سازه ی بیان، قطعه ی تکثیر یافته در پلاسمید همسانه سازی (ptz57r-t) قرار داده شد و با آنزیم های مناسب که محل اثر آنها در روی هر دو حامل همسانه سازی و بیان (pet22b) وجود داشت بریده شد و به منظور قرارگیری در پلاسمید بیان، قطعه مورد نظر از پلاسمید همسانه سازی خارج شد و در پلاسمید بیان قرار داده شد. سازه ساخته شده به باکتری بیان مناسب (rosetta) انتقال داده شد و بهینه سازی بیان ژن در میزبان باکتریایی (سویه ی rosetta باکتری e.coli) انجام گردید. به منظور بررسی بیان ژن پروتئین پوششی در e.coli پس از استخراج پروتئین، الکتروفورز عمودی در ژل پلی آکریل آمید(sds-page) انجام شده و باندی در حدود 35 کیلو دالتون مشاهده گردید، با لکه گذاری وسترن(western blotting) بیان ژن در باکتری مورد تآیید قرار گرفت.