کلونینگ و بیان ژن فیتازباکتری اشرشیاکلی(appa)در پروکاریوت

فیتازها گروه ویژه‏ای از فسفاتازها می‏باشند که هیدرولیز مرحله به مرحله فسفات را از مولکول فیتات انجام می‏دهند، فیتات منبع اصلی ذخیره فسفات در دانه گیاهان می‏باشد. این دسته از آنزیم‏ها در بین گیاهان، آغازیان و حیوانات پراکندگی و گستردگی دارند ولی از این میان فیتازهای میکروبی امیدبخش بوده و مورد توجه می‏باشند. فیتاز تولید شده توسط اشرشیاکلی برای استفاده در صنعت مناسب می باشد. در این مطالعه به منظور همسانه سازی و بررسی امکان تولید فیتاز نوترکیب، ژن فیتاز با استفاده از آغازگر های لینکر دار طراحی شده از باکتری اشرشیاکلی ptcc1330، جداسازی شد. پس از انجام واکنش pcr، پلاسمید و وکتور با آنزیم های برشی (1 ecorو bamhi) مورد هضم قرار گرفتند. ژن فیتاز بطور مستقیم در وکتور pet-21a(+)، کلون شد. در نهایت، پس از انجام واکنش اتصال، پلاسمید حاصل به باکتری اشرشیاکلی bl21(de3) .منتقل شد. و جهت تایید صحت، مورد توالی یابی قرار گرفت. نتایج توالی یابی صحت انجام همسانه سازی را نشان داد. سپس سویه بیانی حاوی ژن هدف با استفاده از iptg در غلظت نهایی 1 میلی مولار تحریک شد. نتایج استخراج پروتئین در sds-page الکترو فورز شده و اندازه پروتئین فیتاز تولید شده45 kd تخمین زده شد. کلید واژه ها: فیتاز، اشرشیاکلی، بیان ژن