جداسازی و کلونینگ ژن لیپاز باکتری باسیلوس سابتیلیسdr8806 در e. coli bl21

پایان نامه
  • وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده علوم
  • نویسنده شیرین امتنانی
  • استاد راهنما احمد آسوده
  • سال انتشار 1392
چکیده

در این مطالعه، ژن کد کننده آنزیم لیپاز باکتری bacillus subtilis dr8806 با استفاده از آغازگرهای اختصاصی لینکردار دارای جایگاه برش برای آنزیم های محدوالاثر bamh? و hind??? جداسازی و در وکتور همسانه سازی ptz57r/t کلون گردید. پس از تاًیید صحت کلونینگ توسط کلونی pcrو برش آنزیمی، پلاسمیدهای نوترکیب حامل ژن هدف به منظور تعیین توالی مورد استفاده قرار گرفتند. توالی ژن لیپاز دارای موتیف حفاظت شده ser-met-gly-ala-his و یک قالب خوانش کامل با طول 639 جفت باز است که یک پیش ساز 212 آمینواسیدی را کد می کند. پس از جاگذاری قطعه الحاقی در وکتور بیانی، وکتور نوترکیب با روش شوک حرارتی به سلول های مستعد escherichia coli bl21(de3)انتقال یافت. تاًیید اولیه حضور ژن هدف در وکتور بیانی به کمک روش کلونی cracking صورت گرفت. همسانه سازی ژن لیپاز در وکتور (+) pet-28a با روش های کلونیpcr ، هضم دوگانه آنزیمی و miniprep pcrتاًیید شد.بیان ژن لیپاز در سلول های میزبان باالقای پروموترt7باکتریوفاژی در حضور القاگر iptg ( mm1، c° 25، 6 ساعت انکوباسیون) انجام گرفت. آنزیم نوترکیبدارای برچسب هیستیدین در انتهای آمین، به کمک کروماتوگرافی تمایلی ni-nta تخلیص شد. آنزیم لیپاز با وزن مولکولی 26.8 کیلودالتون و فعالیت ویژهu/mg 1364، دارای حداکثر فعالیت در c°70 و 8 ph است. یون های دوظرفیتی hg2+و cu2+اثر مهاری شدیدی بر فعالیت آنزیم دارند. بیش از 90% از فعالیت آنزیم در حضور dtnb،sds ، triton x-100 و dttحفظ گردید. لیپاز نوترکیب پایداری قابل توجه ای در حلال‏های آلی نظیر کلروفرم، هپتان و متانول نشان داد. فعالیت آنزیم در حضور مایعات یونی بر پایه ایمیدازولیوم افزایش یافت. پایداری بالای آنزیم در طیف گسترده ای از دما و ph ، مایعات یونی، دترجنت ها و شوینده‏های تجاری از جمله ویژگی های مطلوب این آنزیم به منظور استفاده در صنایع مختلف به ویژه فرمولاسیون مواد شوینده است.

منابع مشابه

کلونینگ، بیان و تعیین خصوصیات لیپاز کایمریک باسیلوس ترموکاتنولاتوس در باکتری Escherichia coli

لیپازهای باکتریایی عضوی از خانواده β/α هیدرولازها هستند که تری آسیل گلیسرول ها را در فاز بین آب-چربی هیدرولیز می کنند. لیپاز باکتری باسیلوس ترموکاتنولاتوس (BTL2) در دمای 75-60 درجه سانتیگراد و pH برابر 10 -8 فعالیت دارد و مناسب استفاده در صنعت شوینده می باشد. در این پژوهش لیپاز باسیلوس ترموکاتنولاتوس کایمریک حاوی توالی توافق شده لیپاز قارچ کاندیداروگوزا (207Gly-Glu-Ser-Ala-Gly211)در ناحیه زانو...

متن کامل

جداسازی و کلونینگ ژن آلفا-آمیلاز باکتری باسیلوس سابتیلیس dr8806 درbl21 e. coli

در این پژوهش، ژن آلفا-آمیلاز سویه گرمادوست bacillus subtilis dr8806 از چشمه دیگ رستم، با استفاده از آغازگرهای لینکردار حاوی جایگاه های برشی bamhi و hindiii جداسازی شد. ژن amy88 با اندازه 2004 جفت باز، به منظور همسانه‏سازی و تعیین توالی در حامل ptz57r/t جاگذاری و در باکتری escherichia coli dh5? کلون گردید. با استفاده از روش کلونی pcr و هضم آنزیمی حضور ژن هدف در ناقل مربوطه تأیید شد.جاگذاری ژن آل...

کلونینگ توالی های ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انتریتیدیس در باکتری E. coli

عفونت های سالمونلایی در تمامی نقاط دنیا در میزبان های بسیاری همچون حیوانات اهلی، وحشی و انسان باعث بروز بیماری می شوند. توانایی وارد شدن و زنده ماندن در سلول های میزبان شرط لازم برای بیماری زایی گونه های سالمونلا است. پروتئین تهاجمی سالمونلا یک فاکتور بیماری زایی مهم است که توسط باکتری به سلول های میزبان منتقل می شود. این مطالعه با هدف کلون سازی نواحی ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انترتیدیس و شناسای...

متن کامل

کلونینگ توالی های ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انتریتیدیس در باکتری E. coli

عفونت های سالمونلایی در تمامی نقاط دنیا در میزبان های بسیاری همچون حیوانات اهلی، وحشی و انسان باعث بروز بیماری می شوند. توانایی وارد شدن و زنده ماندن در سلول های میزبان شرط لازم برای بیماری زایی گونه های سالمونلا است. پروتئین تهاجمی سالمونلا یک فاکتور بیماری زایی مهم است که توسط باکتری به سلول های میزبان منتقل می شود. این مطالعه با هدف کلون سازی نواحی ´5 و ´3 ژن SipA سالمونلا انترتیدیس و شناسای...

متن کامل

کلونینگ، بیان و تعیین خصوصیات لیپاز کایمریک باسیلوس ترموکاتنولاتوس در باکتری escherichia coli

لیپازهای باکتریایی عضوی از خانواده β/α هیدرولازها هستند که تری آسیل گلیسرول ها را در فاز بین آب-چربی هیدرولیز می کنند. لیپاز باکتری باسیلوس ترموکاتنولاتوس (btl2) در دمای 75-60 درجه سانتیگراد و ph برابر 10 -8 فعالیت دارد و مناسب استفاده در صنعت شوینده می باشد. در این پژوهش لیپاز باسیلوس ترموکاتنولاتوس کایمریک حاوی توالی توافق شده لیپاز قارچ کاندیداروگوزا (207gly-glu-ser-ala-gly211)در ناحیه زانوی...

متن کامل

جداسازی و کلونینگ ژن لیپاز باکتری bacillus.thermocatenulatus در مخمرpichia.pastoris

در این تحقیق پس از استخراج dna ژنومی باکتری مولد لیپاز وتکثیر ژن بالغbtl2 با روش pcr، محصول pcr در وکتورpgem5 کلون گردید. سپس ژن btl2 از وکتور کلونینگ خارج و در وکتور بیانی pic9 تحت کنترل پروموتر الکل اکسیداز کلون شدهوسازه حاصل به درون e.coli انتقال داده شد.پس از تایید صحت کلونینگ پلاسمید نوترکیب با آنزیمbglii خطی شد و با الکتروپوریشن به مخمر انتقال داده شد. در نهایت مخمر پیکیا پاستوریس در محیط...

15 صفحه اول

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده علوم

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023