شناسایی ویروس عامل بیماری نکروز عفونی بافتهای خونساز (ihnv) در ماهی قزل آلا به روش nested-rt-pcr و بررسی فیلوژنتیک بر مبنای منطقه mid-g

ویروس نکروز عفونی بافت های خونساز (ihnv) یکی از مهمترین ویروس های بیماری زا در ماهی قزل آلا می باشد. ihnv باعث ایجاد اپیدمی بیماری نکروز عفونی بافت های خونساز در ماهیان جوان شده و ماهیان بالغ، حامل این ویروس می شوند. در این مطالعه، 40 نمونه جمع آوری شده از مزارع پرورش قزل آلا در استان خراسان رضوی به روش nested-rt-pcr مورد بررسی قرار گرفت. بافت های کلیه، کبد و طحال ماهیان و همچنین تخم های چشم زده در شرایط استریل، جهت بررسی به موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، واحد شمال شرق کشور- مشهد منتقل و هموژن گردید. پس از استخراج rna و سنتز cdna، آزمایش rt-pcr برای ژن گلیکوپروتئین، وجود ویروس در یک نمونه را نشان داد. به منظور افزایش اختصاصیت واکنش، یک واکنش ثانویه nested-pcr روی محصول اولیه برای منطقه mid-g صورت پذیرفت. منطقه mid-g یک بخش به طول 303 نوکلئوتید در ژن g ویروس ihn است که شامل منطقه تعیین کننده آنتی ژنیک ویروس می باشد. کشف شده که این منطقه برای آنالیزهای فیلوژنتیک این ویروس بسیار با ارزش است، به همین دلیل در این مطالعه از همین منطقه برای بررسی فیلوژنتیک ویروس یافت شده و مقایسه آن با ویروس های دیگر یافت شده در جهان و ثبت شده در پایگاه بانک ژن ncbi و نسب شناسی آن استفاده گردید. با بررسی درخت فیلوژنتیک، که به وسیله نرم افزار mega5 رسم شد، و با مقایسه توالی مورد نظر با توالی های مربوط به آمریکا، اروپا، ژاپن و کره، قرابت نزدیک ویروس استحصالی از خراسان رضوی با آمریکا و اروپا را می توان توصیه کرد. به احتمال زیاد علت نزدیکی ویروس منطقه مورد مطالعه، واردات تخم چشم زده از آن مناطق می باشد.