تأثیر کورکومین و آلفاتوکوفرول بر میزان بیان ژنهای آپوپتوز و ضد آپوپتوز در اسپرم موش صحرایی

تولید رادیکال های آزاد اکسیژن (ros)، ناشی از فرآیند انجماد، می تواند موجب آسیب اسپرم پستانداران شود. کورکومین و آلفاتوکوفرول به عنوان آنتی اکسیدان موثر در برابر استرس اکسیداتیو شناخته شده است. هدف از این مطالعه بررسی اثرات آنتی اکسیدانی آلفاتوکوفرول، کورکومین و آلفاتوکوفرول + کورکومین بر میزان بیان ژنهای آپوپتوز (bax) و ضد آپوپتوز (bcl-2)، شمارش اسپرم، تحرک، قابلیت زنده ماندن، ظرفیت آنتی اکسیدانی تام و تمامیت dna اسپرم موش صحرایی در طی فرآیند انجماد اسپرم می باشد. اسپرم جمع آوری شده از 10 موش صحرایی بالغ به چهار گروه (10 قطعه به ازای هر گروه) تقسیم شدند: کنترل، کورکومین mm 5/2، آلفاتوکوفرول ?m 200 و کورکومین (mm 5/2) و آلفاتوکوفرول (?m 200). بعد از انجماد، تعداد، تحرک، میزان زنده ماندن و میزان آنتی اکسیدان اسپرم مورد ارزیابی قرار گرفت. میزان یکپارچگی dna بوسیله رنگ آمیزی dna با روش آکریدین اورنج صورت گرفت. پس از ارزیابی پارامترهای منی، استخراج rna از اسپرم های موش صحرایی با استفاده از کیت مورد نظر صورت گرفت. سپس ساخت cdna با استفاده از کیت مربوطه صورت گرفت، نمونه های cdna تهیه شده برای بررسی میزان بیان نسبی ژن آپوپتوز (bax) و ضد آپوپتوز (bcl-2) به روش rt-pcr در مقایسه با ژن 18srna به عنوان ژن رفرانس مورد استفاده قرار گرفتند. میانگین مقادیر بیان نسبی در گروه های مختلف با روش آماری anova مورد مقایسه قرار گرفتند. بعد از فرآیند ذوب و انجماد افزایش معنی داری در میزان تحرک، قابلیت زنده ماندن و یکپارچگی dna نسبت به گروه کنترل مشاهده شد (p<0.05). بلافاصله بعد از انجماد میزان tac در گروه کورکومین و آلفاتوکوفرول نسبت به گروه کنترل افزایش یافت (p<0.05). میزان بیان ژن آپوپتوز به میزان معنی داری کاهش و بیان ژن ضد آپوپتوز در گروه های حاوی کورکومین، آلفاتوکوفرول و ترکیب هر دو نسبت به اسپرم های گروه کنترل افزایش یافته بود. براساس نتایج بدست آمده در این مطالعه می توان نتیجه گرفت که افزودن آلفاتوکوفرول و کورکومین به عنوان آنتی اکسیدان قوی در طی انجماد منجر به اثرات مثبت بر پارامترهای اسپرم پس از ذوب در رت بالغ می شود. همچنین افزودن آلفاتوکوفرول و کورکومین موجب حفاظت اسپرم با کاهش بیان ژن آپوپتوز می شود.