اثرh2o2 بر رشد سلول های اپی تلیال پستان گاو و بیان ژن stst5 در شرایط آزمایشگاهی

استرس گرمایی و استرس اکسیداتیو می توانند تأثیری جدی بر شیردهی حیوان، هم چنین نکروز و از بین رفتن سلول ها داشته باشند. هدف این پژوهش تأثیرh2o2 بر روی رشد سلول های اپی تلیال پستان گاو و بیان ژن stat5 در این سلول ها بود. در پژوهش حاضر چندین پروتکل مختلف جهت کشت خالص سلول های اپی تلیال پستان گاو مورد آزمایش قرار گرفت. از آنزیم های مختلف، جهت هضم آنزیمی بافت پستان و روش های متفاوت، در راستای کشت خالص سلول های اپی تلیال پستان استفاده شد ولی به دلایل عمده ای (از جمله استفاده نکردن از فاکتورهای رشد) کشت خالص سلول های اپی-تلیال نتیجه بخش نبود و در نهایت این سلول ها به صورت مخلوط کشت داده شدند. به این منظور سلول های بافت پستان گاو از کشتارگاه تهیه و جهت کشت اولیه مورد استفاده قرار گرفت. سلول ها پس از رشد و پوشش کامل کف فلاسک به تعداد 16 فلاسک پاساژ داده شد. هر چهار عدد فلاسک به عنوان یک تیمار در نظر گرفته شد. در تیمار اول مقدار 5/0 میلی مولار، در تیمار دوم 3 میلی مولار و در تیمار سوم 5 میلی مولار h2o2 (در فلاسک cm225) اضافه شد و چهار عدد فلاسک بدون افزودن h2o2 به عنوان شاهد در نظر گرفته شدند. بعد از گذشت هشت ، 16 و 20 ساعت از اعمال تیمارها رشد سلول ها توسط میکروسکوپ اینورت بررسی شد. مشاهدات میکروسکوپی نشان داد، با افزایش غلظت h2o2 نکروز سلولی افزایش پیدا کرد. سپس توسط تکنیک real time pcr بیان ژن stat5 که یکی از مهم ترین ژن های دخیل در تکثیر سلول های پستان می باشد، مورد بررسی قرار گرفت. بیان ژن stat5 بین غلظت 5/0 میلی مولار و گروه کنترل در سطح 95 درصد معنی دار بود. اما بین گروه کنترل و غلظت 3 و 5 میلی مولار هیچ تفاوت معنی داری مشاهده نشد. نتایج نشان داد که با افزایش غلظت h2o2 میزان نکروز سلولی افزایش می یابد، که نشان می دهد استرس اکسیداتیو می تواند خطری جدی برای سلامت سلولهای پستانی باشد. هم چنین در غلظت 5/0 میلی مولار h2o2، بیان ژن stat5 کاهش پیدا کرد با افزایش غلظت در سطح 3 میلی مولار این کاهش بیان ژن کم تر شده و در غلظت 5 میلی مولار افزایش بیان ژن stat5 مشاهده شد، که با آنچه به عنوان نقش این ژن متصور است، تفاوت داشت.