انتقال ژن کیتیناز جدا شده از هندوانه ابوجهل به گیاه آرابیدوپسیس وارزیابی گیاهان تراریخت با پاتوژن قارچی آلترناریا براسیکولا

یکی از مشکلات تولید محصولات جالیزی بخصوص گیاهان خانواده کدوئیان خسارت بالای پاتوژنهای قارچی است که استفاده بی رویه از سموم را دی پی داشته است. از طرفی بعضی از خویشاوندان وحشی خانواده کدوئیان مقاومت خوبی را در تقابل با انواع پاتوژنها بروز داده اند و میتوان از آنها به عنوان ذخایر ژنتیکی برای اصلاح گیاهان زراعی حساس بهره برد. در این پژوهش توالیهای ژنی کد کننده ژن رمزگردان کیتیناز از هندوانه ابوجهل جداسازی شد. برای این کار از dna ژنومی یا cdna سنتز شده از rna کل به عنوان الگو برای جداسازی توالی مورد نظر استفاده شد. پس از بررسی های بیوانفورماتیکی روی تولیهای مشابه موجود در بانک ژن، پرایمرهای دقیق و دژنره از توالیهای اجماعی طراحی شدند و توالیهای مذکور پس از تکثیر با pcr در وکتورهای ta همسانه سازی و توالییابی شدند. در مرحله بعد پرایمرهای حاوی سایت برشی xbai و saci طراحی شدند و قطعات ژنی پس از تکثیر مجدد در وکتورهای دوتایی pbi121 همسانه سازی و پس از بررسی های اولیه و اطمینان از صحت آنها، به اگروباکتریوم نژاد gv3101 منتقل شدند. گیاهان آرابیدوپسیس با اگروباکتریومها تلقیح و گیاهان تراریخت در محیط انتخابی گزینش شدند. این گیاهان سپس با روشهای pcr و rt-pcr ارزیابی شدند. نتایج نشان داد با استفاده از هر دو نوع الگوی dna ژنومی و cdna، قطعه ژنی به طول 978 جفت باز که شامل orf کامل ژن کیتیناز بود ایجاد شد که نشان دهنده عدم وجود اینترون در ژن مذکور بود. آزمون pcr گیاهان انتخابی نشان داد که این گیاهان ژن کیتیناز را دریافت کرده اند و آزمون rt-pcr بیانگر نسخه برداری این ژن در اکثر لاینهای تراریخت بود. بررسی های اولیه نشان داد تغییرات مرفولوژیک یا فیزیولوژیک خاصی در گیاهان تراریخت ایجاد نشده است و نمو آنها مشابه گیاهان شاهد غیر تراریخت بوده است.