همسانه سازی و بیان ژن trt رمز کننده آنزیم وارونوشتاز از باکتری گرمادوست geobacillus stearothermophilus strain 10 و بررسی فعالیت آنزیمی آن

فرایند وارونویسی (reverse transcription)همراه با ازدیاد (rt-pcr) dna روش قوی مولکولی است که برای تشخیص، تعیین کمیت و بررسی بیان ژن و ویروس های rna دار، کاربرد بسیاری دارد. کارایی این واکنش ها بیشتر به ویژگی های مولکولی آنزیم های وارونوشتاز(reverse transcriptase) موجود وابسته است. ساخت cdna در دمای بالا مزیت های بسیاری دارد از جمله حذف ساختارهای دوم rna و بنابر این وارونوشتازهای پایـدار حرارتی، ابزار مهمی برای ساختcdna با طول کامل شناخـته شده اند. در این بـررسی، dna ژنـومی از باکتـری گرمادوسـت geobacillus stearothermophilus strain10 جداسازی و برای شناسایی ژن trt که محصول orf آن پروتئینی با توانمندی وارونویسی است، به کار گرفته شد. این orf شبیه orfهای دیگر از اینترون های گروه ii باکتری هاست. یک جفت پرایمر طراحی شده، برای تکثیر و همسانه سازی ژن trt در پلاسمید ptz57r/t استفاده شد و پس از تعیین توالی برای تایید هویت آن، به پلاسمید pet-28a منتقل شد . ژن trt در میزبان هترولوگ escherichia coli بیش بیان گردید و محصول پروتئین آن پس از خالص سازی، در واکنش rt-pcr در دمای °c70 استفاده شد.