جداسازی و شناسایی باکتری های هوازی تولید کننده آنزیم کیتیناز از منابع محیطی

کیتین پلیمر خطی از واحدهای ان استیل گلوکز آمین است و توسط گروه وسیعی از موجودات مانند باکتری ها، قارچ ها، گیاهان و حیوانات سنتز می شود. کیتینازها گروهی از آنزیم های کمپلکس هستند که قادرند کیتین را به صورت کامل تجزیه کنند و جهت حذف پسماندهای کیتینی و کنترل بیولوژیک حشرات و آفت های قارچی کاربرد دارند. هدف از تحقیق حاضر، شناسایی باکتری های هوازی مولد کیتیناز از منابع محیطی می باشد. برای این منظور نمونه هایی از آب دریا، رسوبات، سخت پوستان دریایی، خاک مزارع کشاورزی و خاک منطقه نگهداری و پرورش زنبور عسل جمع آوری شد. سپس باکتری های مولد کیتیناز با کشت در محیط مایع و بعد در محیط جامد حاوی 3 درصد کیتین کلوئیدی، جداسازی شدند. کیتین از پسماند پوسته های میگو تهیه شد. در مرحله بعد جدایه های مولد کیتیناز بر اساس قطر هاله شفاف در محیط جامد انتخاب شدند و شرایط رشد بهینه ی دما، ph و غلظت نمک nacl، 4 جدایه برتر بررسی شد.از این 4 جدایه، یک جدایه که بهترین تولید کیتیناز را نشان داد، انتخاب و فاکتورهایی همچون بهترین درصد کیتین، بهترین منبع نیتروژن، دما و ph بهینه تولید آنزیم در مورد آن مشخص شد. پایداری آنزیم تولید شده در دماهای مختلف و ph های متفاوت و واحد آنزیمی آن نیز محاسبه شد. این جدایه ها با استفاده از تست های بیوشیمیایی و تعیین سکانس ژن 16srrna تعیین هویت شدند. در نتیجه این تحقیق 38 جدایه مولد کیتیناز جداسازی شد. 4 جدایه که بیشترین میزان تولید را داشتند متعلق به جنس هایachromobacter، lysinibacillus، paenibacillus و vibrio تشخیص داده شدند. از این بین جدایه ی wz1 (vibriogroup 512) بهترین تولید کننده آنزیم تشخیص داده شد. شرایط بهینه برای تولید کیتیناز توسط این جدایه عبارتبودند از: دمای c?30، 7ph، 5درصد nacl، منبع نیتروژن عصاره مالت، 48 ساعت انکوباسیون و 5/2 درصد کیتین. فعالیت آنزیمی در دمای 45 تا 50 درجه سانتی گراد و 5/6 phبه حداکثر مقدار خود می رسد. واحد آنزیمیکیتیناز و محتوای پروتئینی باکتری مورد مطالعه، به ترتیب 51/0 میکرومول و mg/ml 89/0 بودند. این پروتئین به طور نسبی خالص سازی شده و وزن مولکولی آن حدود 45 کیلودالتون گزارش شد.