کلون، بیان، تخلیص و بررسی آنتی ژنیسیته نواحی آنتی ژنیک پروتئین vaca هلیکوباکتر پیلوری

زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین باکتری است که جوامع انسانی را در بعد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. ژن vaca از مهمترین شاخص های بیماری زایی این باکتری می باشد که باعث تشکیل واکوئل های اسیدی در سیتوپلاسم سلول و تخریب سلول های اپیتلیال معده می شود. هدف از این مطالعه بیان بالا و بررسی خواص آنتی ژنیک پروتئین نوترکیب vaca هلیکوباکتر پیلوری در سرم انسان و موش آلوده با هدف طراحی واکسن علیه هلیکوباکتر پیلوری در آینده است. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، قطعه حاوی ناحیه دارای بالاترین خاصیت آنتی ژنیک ژن vaca به طول 1233 جفت باز براساس برنامه های بیوانفورماتیکی بدست آمد، پس از تکثیر ناحیه مورد نظر با استفاده از روش pcr، در ناقل پلاسمیدی pet32a کلون و بیان شد. پس از خالص سازی پروتئین نوترکیب، آنتی ژنیسیته آن به روش وسترن بلات با سرم افراد آلوده به عفونت فعال هلیکوباکتر پیلوری و سرم موش های تلقیح شده با پروتئین نوترکیب خالص شده بررسی شد. یافته ها: نتایج pcr و تعیین توالی نشان داد که ژن هدف به درستی در ناقل مورد نظر کلون شده است. بیان پروتئین با استفاده از iptg القا شد. پروتئین بیان شده به وسیله کیت ni-ntaتخلیص و سپس دیالیز گردید و با آنتی بادی های استفاده شده در وسترن بلات واکنش داد. پروتئین نوترکیب با وزن ملکولی 65 کیلو دالتون و غلظت mg/ml1/2 بدست آمد. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب vaca دارای خاصیت آنتی ژنیک و ایمنوژنیک می باشد. بنابراین می توان از آن به عنوان کاندید مناسبی برای طراحی کیت های تشخیصی و واکسن هلیکوباکتر پیلوری استفاده نمود.