جداسازی و همسانه سازی ژن لاکتوفرین شتر عربی (camelus dromedarius) و انتقال آن به گیاه توتون

در سال های اخیر، با پیشرفت های که در زیست شناسی مولکولی، مهندسی ژنتیک و کشت بافت گیاهی به دست آمده، روش های جدید و کاراتری برای غلبه به محدودیت های به نژادی گیاهی سنتی در ایجاد گیاهان مقاوم به بیماری بوجود آمده است. در این روش ها با جداسازی و انتقال ژن پروتئین های ضدمیکروبی، می توان گیاهان تراریخت مقاوم به بیماری تولید کرد. علاوه بر این می توان این ترکیبات ضدمیکروبی تولید شده در گیاهان را خالص سازی کرده و به مصارف مختلف رساند. در این پژوهش cds ژن لاکتوفرین از بافت پستانی شتر عربی جداسازی شد و ابتدا در ناقل ptz57r همسانه سازی شد. پس از تایید ژن جداسازی شده، این توالی ژنی از ناقل ptz57r برش و در ناقل بیانی part27 تحت پروموتر 35s دوگانه همسانه سازی گردید. سازه آماده شده با استفاده از الکتروپوریشن به باکتری آگروباکتریوم سویه c58 منتقل شد.سپس با استفاده از روش دیسک برگی به گیاه توتون منتقل گردید. گیاهان باززایی شده پس از تایید تراریختی بوسیله pcr ژنومیک، pcr روی cdna و همچنین real time pcr برای آزمایش فعالیت ضدمیکروبی بکار برده شدند. پروتئین استخراج شده از گیاهان تراریخت در محیط in vitro اثر بازدارندگی بر علیه بیمارگرهای جانوری و گیاهی نشان داد. نتایج آزمایش cfu نشان داد که لاکتوفرین تولیدی گیاهان تراریخت، اثر ممانعت کننده نسبتاً بالایی روی این بیمارگرها داشته است.