طراحی و ساخت آنتی ژن چند اپیتوپی تحریک کننده سلول های t بر علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس و ارزیابی پاسخ ایمنی در موش

در این تحقیق شناسائی اپیتوپ های غالب تحریک کننده سیستم ایمنی اختصاصی سلول های t و بواسطه آن طراحی کاست ژنی وابسته به پنج پروتئین اکینوکوکوس گرانولوزوس شامل eggst, ega31, eg95, egtrp, p14-3-3 و بررسی پاسخ ایمنی آن انجام گرفت. اپیتوپ ها با نرم افزار های propred و iedbبا بهترین قدرت اتصال به مولکول های mhc پیش بینی شدند. پس از سنتز dna، قطعه مورد نظر داخل وکتور بیانی pet41a+ کلون شد به منظور فهم بهتر اثر تجمعی اپیتوپها قطعه دربرگیرنده اپیتوپ های آنتی ژن ega31 با pcr تکثیر وجداگانه در دو وکتورpgex4t1 وpegfp-n1 کلون شد. پروتئینهای کایمریک در سلولe. coli فیوژن با gst بیان شدند. بیان gfp-chega31 در سلول های cho با فلورسنت میکروسکوپی و rt-pcr تائید شد. بیان پروتئینهای کایمریک با وسترن بلاتینگ تائید شد، سپس با روش افینیتی خالص سازی و به موش های c57bl/6 همراه با اجوانت فروند تزریق شدند. سلول های splenocyte طحال به مدت 72 ساعت در محیط dmem در حضور آنتی ژن، کشت داده شدند. نتایج الایزا نشان داد کهifn-? در سلول های طحال موشهای ایمن شده با آنتی ژن gst-chegmea حدودا 1300 پیکوگرم و در گروه gst-chega31 حدودا 634-1300 پیکوگرم و در گروه gfp-chega31 نیز 1300پیکوگرم در میلی لیتر بیان شد، که نشان داد پروتئین کایمریک چند اپیتوپی بخوبی سیستم ایمنی سلولی را تحریک کرده است. از طرفی افزایشی در میزان il4, il10مشاهده نشد. موشهای ایمن شده، با تعداد پانصد پروتواسکولکس زنده چالنج شدند که بعد از سه ماه کیست ها شمارش شدند. مشاهدات نشان داد که آنتی ژن gst-chega31 50% و در گروه تزریق شده با pegfp-chega31 حدودا 60 % مصونیت ایجاد نمودند، در حالیکه آنتی ژن کایمریک gst-chmeaمصونیت 6/99-100% علیه پروتواسکولکس ایجاد نمود. نتایج گواه این مطلب است که پیش بینی اپیتوپ ها بر اساس متد بیوانفورماتیک جهت طراحی آنتی ژن بر علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس مفید بوده است