تولید آنتی بادی مونوکلونال بر ضد گلیکوپروتئین erns و پروتئین ns3 نوترکیب ویروس اسهال ویروسی گاوان (سویه nadl)
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده دامپزشکی
- نویسنده مریم اختلاط
- استاد راهنما مسعود رضا صیفی آباد شاپوری
- سال انتشار 1391
چکیده
اسهال ویروسی گاوان (bvd) با یک انتشار جهانی، یکی از بیماری های مهم اقتصادی در گاو می باشد. ویروس اسهال ویروسی گاوان (bvdv) متعلق به خانواده فلاوی ویریده و جنس پستی ویروس، یکی از مهمترین پاتوژن های ویروسی گاو است که باعث بروز سندرم های بالینی مختلفی می شود. دام های مبتلا به شکل عفونت پایدار با ویروس اسهال ویروسی گاوان، به عنوان منبع اصلی حفظ و انتشار ویروس بین گله ها محسوب می شوند، بنابراین تعیین و حذف حیوانات دارای عفونت پایدار در کنترل این بیماری و ریشه کنی ویروس ضروری است. معمولا علائم کلینیکی مشخصی در عفونت با ویروس bvd وجود ندارد، بنابراین تشخیص آن بر پایه روش های سرولوژی و جداسازی ویروس می باشد. از نظر ژنتیکی و آنتی ژنی، erns (گلیکوپروتئین 48) و ns3 (پروتئین غیر ساختمانی 3) به عنوان پروتئین های ایمنی زای ویروس bvd، بین جدایه های مختلف ویروس محافظت شده می باشند. بنابراین این پروتئین ها در طراحی الیزا به منظور مطالعات سرولوژیکی یا شناسایی حیوانات pi، به عنوان یک آنتی ژن انتخابی هستند. هدف از این مطالعه تولید آنتی بادی مونوکلونال ضد پروتئین های نوترکیب ernsو ns3 بود. بدین منظور یک قطعه از ژنوم ویروس bvd(سویه nadl) که مسئول کد کردن سکانس erns بود، با استفاده از rt-pcr تکثیر و در ناقل بیانی pmalc2x تحت کنترل پروموتور lac کلون گردید. بعد از تعیین توالی ژن، پروتئین نوترکیب در باکتری اشریشیا کلیbl-21 بیان و به وسیله sds-page و وسترن بلات آنالیز گردید. پروموتور قدرتمند ناقل pmalc2x، امکان بیان بالای پروتئین نوترکیب mbp-erns را فراهم نمود. پروتئین نوترکیب mbp-ns3 نیز به طور همزمان در آزمایشگاه تولید گردید. پروتئین های نوترکیب mbp-erns و mbp-ns3 بیان شده در اشرشیا کلی با کمک ستون کروماتوگرافی رزین آمیلوز خالص و به عنوان آنتی ژن برای تولید آنتی بادی مونوکلونال استفاده شدند. پس از ایمن سازی موش های balb/c با آنتی ژن های نوترکیب، موشی که با استفاده از الیزای غیر مستقیم بیشترین عیار آنتی بادی ضد erns یا ns3را نشان داد برای استحصال طحال و فیوژن انتخاب گردید. سلول های طحالی موش های ایمن توسط پلی اتیلن گلیکول (peg) با سلول های میلوما sp2/0ادغام شدند. مخلوط سلولی فیوژن یافته در محیط hat وارد و در پلیت 96 خانه تقسیم گردیدند. سپس مایع رویی کلون های اولیه توسط الیزای غیر مستقیم غربالگری شدند. کلون های مثبت بعد از 3 بار کلونینگ، انتخاب و واکنش پذیری آنتی بادی های مونوکلونال با آنتی ژن های نوترکیب و طبیعی از طریق وسترن بلاتینگ تایید شدند. بر اساس این نتایج به نظر می رسد آنتی ژن های نوترکیب erns و ns3 و آنتی بادی های اختصاصی تولید شده بر ضد آن ها، به منظور طراحی روش های تشخیصی آزمایشگاهی مفید باشند.
منابع مشابه
طراحی تست الایزای رقابتی به منظور ردیابی آنتی بادی های ضد ویروس اسهال ویروسی گاوان
بیماری اسهال ویروسی گاوان و بیماری مخاطی سندرومهایی با نشانههای کلینیکی متفاوت هستند که توسط ویروسی مشابه از جنس پستی ویروس و از خانواده فلاوی ویریده ایجاد می گردند. در تشخیص اولیه وضعیت آلودگی در گله های گاو غالباً بشکل روزمره از آزمایش سرولوژیک الایزا استفاده می شود. آزمایش الایزا ممکن است بصورت غیر مستقیم و یا رقابتی انجام گردد اما بدلیل احتمال وجود واکنش های غیراختصاصی الایزای رقابتی که در آ...
تولید آنتی بادی مونوکلونال بر ضد پروتئین نوکلئوکپسید ویروس برونشیت عفونی ماکیان (ibv)
ویروس برونشیت عفونی (ibv) طیور یکی از عوامل بیماری زای ویروسی بسیار مهم است که دارای چندین سروتیپ می باشد. کنترل مؤثر عفونت های ناشی از این ویروس از طریق واکسیناسیون و تشخیص سریع بیماری قابل انجام است. پروتئین نوکلئوکپسید ibv (n) یکی از پروتئین های ساختمانی حفاظت شده این ویروس است که برای طراحی کیت های تشخیصی و تولید آنتی بادی منوکلونال مورد توجه قرار گرفته است. در مطالعه ی حاضر پروتئین n وی...
متن کاملتولید آنتی بادی منوکلونال ضد پروتئین نوترکیب np ویروس آنفلوانزای پرندگان سروتیپ h9n2
ویروس آنفلوانزایa ، پرندگان، انسان، خوک، اسب و موش خرما را آلوده می سازد. پرندگان آبزی مخازن طبیعی همه سروتیپ های ویروس می باشند. تشخیص آزمایشگاهی عفونت با ویروس آنفلوانزای پرندگان بر اساس جداسازی و تعیین هویت ویروس، جستجوی اسید هسته ای ویروس و آزمایش های سرولوژیکی انجام می شود. از آنجاییکه گلیکو پروتئین های سطحی ویروس آنفلوانزا تغییرات آنتی ژنیکی زیادی دارند، طراحی روش های تشخیصی بر اساس آن ها...
تولید آنتی‌بادی مونوکلونال بر ضد پروتئین نوکلئوکپسید ویروس برونشیت عفونی ماکیان (IBV)
ویروس برونشیت عفونی (IBV) طیور یکی از عوامل بیماری‌زای ویروسی بسیار مهم است که دارای چندین سروتیپ می‌باشد. کنترل مؤثر عفونت‌های ناشی از این ویروس از طریق واکسیناسیون و تشخیص سریع بیماری قابل انجام است. پروتئین نوکلئوکپسید IBV (N) یکی از پروتئین‌های ساختمانی حفاظت شده این ویروس است که برای طراحی کیت‌های تشخیصی و تولید آنتی‌بادی منوکلونال مورد توجه قرار گرفته است. در مطالعه‌ی حاضر پروتئین ...
متن کاملتولید پروتئین نوترکیب Tax ویروس HTLV 1 در سویه باکتریایی Rosetta DE3
زمینه و اهداف:HTLV1 اولین رتروویروس انسانی شناخته شده است که در انسان تولید بیماری میکند. عمده فیزیوپاتولوژی بیماری های مربوط به HTLV1 به خصوصیات پروتین Tax این ویروس مربوط می شود. استفاده از گونه های جهش یافته پروتین Tax در کنار دارو های تنظیم کننده سیستم ایمنی می تواند به عنوان تعدیل کننده پاسخ های ایمنی قوی در طراحی واکسن بکار گرفته شود. این پاسخ های ایمنی مضر،باعث بیماری HAM-TSP میشود و تع...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده دامپزشکی
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023