بررسی توزیع و پایداری اسپرم های ترانس ژن دم اپیدیدیم رت پس از انتقال ژن وابسته به اسپرم وکتور pires - egfp

انتقال ژن به واسطه اسپرم به منظور تولید حیوانات ترانس ژن اسنفاده شده است. میزان موفقیت متفاوتی در تولید حیوانات ترانس ژن در مطالعات متغدد گزارش شده است. عدم موفقیت در انجام این روش عمدتا مربوط به میزان پایداری ژن های انتقال داده شده می باشد. سایر مشکلاتی که ممکن است در عدم موفقیت این روش نقش داشته باشد احتمالا به آسیب های بیضه در زمان ترانسفکشن مربوط می شود. در مطالعه حاضر پایداری بیان وکتورpires-egfp در ترکیب با لیپوزوم بعد از smgt در اسپرم های دم اپیدیدیم موش صحرایی قرار گرفت. 55 سر موش صحرایی در 5 گروه به شرح زیر تقسیم شدند. گروه کنترل (10n=) که هیچگونه درمانی در آن ها انجام نشد. گروه دریافت کننده dotap (15n=) که 100میکرولیتر محلول کاتیون dotap دریافت نمودند. گروه دریافت کنندهdotap /پلاسمید که 50 میکروگرم پلاسمید در 100میکرولیتر محلول dotap را دریافت نمودند. گروه پلاسمید (15n=)که 50 میکروگرم پلاسمید را دریافت نمودند. در روزهای 2، 5، 10، 30 و 60 پس از ترانسفکشن اسپرم های دم اپیدیدیم جمع اوری و در محلول whittnes hepes شناور و پارامتر های مربوط به اسپرم شامل غلظت، تحرک، ناهنجاری و درصد اسپرم های زنده نسبت به مرده مورد ارزیابی قرار گرفتند. میزان بیان ژن egfp با استفاده از روش های rt-pcr، realtimepcrو میکروسکوپ فلورسنت ارزیابی گردید. با استفاده از میکروسکوپ فلوروسنت بیان ژن egfp در همه ی نمونه-های روز 2 تا 60 بعد از تزریق مشاهده شد. آنالیز بیان ژن egfp به وسیله rt-pcr همراه با نتایج مشابهی بود. نتایج realtime pcr بالاترین سطح بیان ژن در روز 30 بعد از تزریق را نشان داد (05/0>p). کمترین سطح بیان ژن در روز 2 و60 بعد از smgt مشاهده شد (05/0>p).نتایج تحقیق نشان داد که تعداد و تحرک اسپرم تحت تاثیر ریز تزریق قرار نگرفت(05/0p) نتایج این مطالعه نشان داد به دنبال استفاده از روش tmgt، dna اگزوژن به طور پایدار تا 60 روز بعد از tmgt بیان می شود، با این حال به دلیل بیان بالاتر ژنegfp در روز 30 بعد از تزریق‏، این زمان بهترین زمان برای جفت گیری می باشد. درصد اسپرم های زنده نسبت به مرده پس از تزریق پلاسمید با و بدون dotap در روز دو کاهش یافت (05/0>p). همچنین نتایج این مطالعه نشان داد که برخی از شاخص های باروری متعاقب ریز تزریق درون بیضه ها تحت تاثیر قرار می گیرد و این بیشتر ممکن است در عدم موفقیت تکنیک smgt موثر باشد.