ایجاد باکتری e.coli نوترکیب حاوی ژنهای تولیدکننده ی پلی هیدروکسی آلکانوآت (pha)

نام خانوادگی: جاری نام: مریم عنوان: ایجاد باکتری e.coli نوترکیب حاوی ژنهای تولید کننده ی پلی هیدروکسی آلکانوآت pha)). اساتید راهنما: دکتر سعید رضا خاتمی- دکتر حمید گله داری استاد مشاور: دکتر محمد شفیعی درجه تحصیلی: کارشناسی ارشد رشته: ژنتیک دانشکده:علوم محل تحصیل: دانشگاه شهید چمران اهواز تاریخ فارغ التحصیلی: 26/6/91 تعداد صفحات: 91 کلمات کلیدی: پلی هیدروکسی بوتیرات (phb)، ralstonia eutropha h16، ژنهای phbcab. چکیده: پلی هیدروکسی بوتیرات (phb)، دسته ای از پلی هیدروکسی آلکانوآت (pha)، گروهی از پلیمرهای ذخیره ای باکتریایی می باشند که بوسیله ی ارگانیسم های متعددی در پاسخ به محدودیت غذایی تولید می گردند. این پلیمر ها، پلاستیک های زیست تخریب پذیر می باشند که می توانند جایگزین خوبی برای پلاستیک های پتروشیمیایی رایج باشند. ralstonia eutropha h16 یکی از تولیدکنندگان بالقوه ی phb می باشد. اگرچه توانایی تولید و انباشته کردن این پلیمر در r.eutropha به اثبات رسیده است، ولی هزینه ی تولید بسیار بالای آن، بکارگیری pha را بعنوان بیوپلاستیک محدود کرده است. از اینرو تلاش های زیادی برای کاهش هزینه ی تولید از طریق ایجاد باکتری های نوترکیب و استفاده ی منبع کربن ارزان انجام شده است. phb طی 3 مرحله ی آنزیمی شامل یک آنزیم ?-کتوتیولاز (phba)، یک استواستیل coa ردوکتاز (phbb) و یک pha پلیمراز (phbc) سنتز می گردد. در این مطالعه اپرون 3 ژن کد کننده ی آنزیمهای تولید کننده ی phb شامل ژنهای phbcab از ژنوم استخراج شده r.eutropha با استفاده از پرایمرهای دارای جایگاه برش آنزیم محدود کننده bamhi و hindiii تکثیر و به وکتور بیانی pet28a کلون گردید و به e.coli سویه ی dh5? و bl21 ترانسفورم و صحت ترانسفورماسیون با کلونی pcr، هضم آنزیمی پلاسمید استخراج شده و تعیین توالی تأیید شد.