خالص سازی آنزیم پاراکسوناز1ازسرم انسان وبررسی اثرات منتخبی از میوه ها,داروهای گیاهی وشیمیایی وچاشنی هابرفعالیت آن

پاراکسوناز1سرم انسان یک گلیکوپروتئین وابسته به کلسیم متشکل از 354اسیدآمینه است.این آنزیم توانایی هیدرولیز استرهای اسیدکربوکسیلیک آروماتیک ،استرهای حلقوی، لاکتونها و فسفوتیواسترها را دارا می باشد.اگرچه سوبسترا و فعالیت فیزیولوژیکی طبیعی آن همچنان ناشناخته باقی مانده است.پاراکسوناز1بامهاراکسیداسیون ldlکه به عنوان فاکتور آغازگر و پیشبرنده آترواسکلروز شناخته می شود،نقش موثری رادربیماریهای قلبی ایفامی نماید. آنزیم همچنین قادر به هیدرولیز هموسیستئین تیولاکتون به عنوان یک ریسک فاکتور جدید مطرح شده در آترواسکلروز می باشد.هیدرولیز ترکیبات ارگانوفسفاته از جمله گازهای عصبی و حشره کش ها پاراکسوناز1 رابه عنوان پاکساز بیولوژیکی در بدن معرفی می کند.پلی مورفیسم های مورد بررسی ژنpon1 دردوناحیه کدینگ و پروموتور قرارگرفته اندکه به نظرمیرسد تاثیر به سزایی در تنظیم فعالیت و سطح سرمی وکبدی آن ایفامی نماید.البته فاکتورهای محیطی نیز از عوامل موثر تنظیمی آنزیم به شمار میرود.که تاکنون موارد بسیاری از آنها به صورت invivoوinvitro در سطح ژن و پروتئین آنزیم موردمطالعه قرار گرفته اند.هدف از این تحقیق بررسی تاثیر آنتی اکسیدانها وترکیبات فلاونوئیدی گیاهان به صورت invitro برسطح فعالیت آنزیم خالص شده از سرم انسان بود. ابتدا ml30 سرم به صورت پولد تهیه گردید.بعدازسانتریفیوژ،به مدت 4ساعت در مجاورت تریتون x-100دردمای 4درجه سلسیوس قرارگرفت.به منظور خالص ساز ی از سه مرحله کروماتوگرافی تعویض یونی deae-سفادکسa-50 ،کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون g-200 ومرحله دوم کروماتوگرافی deaeسفادکسa-50 استفاده گردید. در هر مرحله کروماتوگرافی به منظور بررسی فعالیت آنزیم از دو سوبسترای فنیل استات وپاراکسون استفاده شد. غلظت پروتئین در هر فراکشن به روش لوری سنجیده شد. الکتروفورزsds-page به عنوان آخرین مرحله پروسه خالص سازی مورداستفاده قرار گرفت. عصاره الکلی هر کدام ازگیاهان تهیه گردید.ازهریک 10غلظت 10, 25 ,50 ,100, 125 ,150, 200 ,225 ,250و 300 میکروگرم آماده شد.تاثیر هرکدام از غلظتها بر فعالیت پاراکسونازی(پاراکسون)وآریل استرازی(فنیل استات)مورد بررسی قرارگرفت.بعدازتعیین غلظت های اپتیمم گیاهان موثر ,سرعت ماکسیمم و ثابت میکائیلیس منتن محاسبه شد. نتایج در نرم افزار (version16) spss با استفاده از آزمون های آماری anova one way مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. طی این سه مرحله آنزیم خالص با فعالیت u/l200و فعالیت اختصاصیu/mg250 بدست آمد.باندالکتروفورز نشان دهنده آنزیم خالص باوزن مولکولی 45کیلودالتون بود.vmax وkmآنزیم خالص شده در مجاورت پاراکسون به ترتیب u/l 3/12±200 و 01/0±6/1 بدست آمدودر مجاورت فنیل استات 123±20000و003/0±75/0 تعیین گردید. نتایج حاصل از این تحقیق ارتباط معنی داری را بین عصاره ها و افزایش فعالیتهای آنزیم نشان داد.عصاره الکلی فلفل (g?100) زرشک(g?50) کلم بروکلی(g? 125) شوید(g? 100 ) سماق (g?100)باعث افزایش فعالیت پاراکسونازی می شود.این افزایش برای فلفل زرشک کلم بروکلی شوید 125? وبرای سماق 166? تعیین گردید. همچنین نشان داده شدکه عصاره های شوید(g?100)چای سبز(g?50)کرفس(g? 125)باعث افزایش فعالیت آریل استرازی آنزیم خالص شده می گردد.این افزایش برای شوید165?چای سبز156? وکرفس 150?تعیین شد.