کلونینگ و توالی یابی ژن m2 از ویروس a آنفولانزا سویه h9n2 وانتقال آن به وکتور بیانی pegfp-n1

چکیده بارزترین نقش پروتئین m2 در ویروس a آنفولانزا ایجاد یک کانال یونی یکطرفه برای عبور h+ به درون ویروس می باشد. این قابلیت در اسیدی شدن محتویات ویروس و رها سازی ژنوم آن به درون سیتوپلاسم میزبان نقش داشته و امری حیاتی برای تکثیر ویروس به شمار می رود. بر اساس شواهد، انسداد این کانال از تأثیر ویروس بر سلول میزبان جلوگیری کرده و مانع بیماریزایی آن می شود. با توجه به اهمیت این پروتئین کانالی در ارائه راه کارهای جدید برای مقابله با انواع ویروسهای a آنفولانزا که بسیاری از جمعیتهای حیوانی و انسانی را تهدید می کنند، این تحقیق سعی دارد تا با توالی یابی ژن مسئول سنتز این پروتئین چشم اندازروشنی را برای تولید آنتی بادی ها و داروهای جدید محدود کننده این ویروس ایجاد کند. در این تحقیق سعی شده است تا میزان بالای حفظ توالی (sequence conservation) ژنی، از طریق مقایسه توالی ژن m2ای که از یک ویروس a آنفولانزا با نام علمی a/chicken/iran/101/1998(h9n2) استخراج شده است با دیگر توالی هایی از این ژن که در تحت تیپهای متداول این ویروس در سطح جهان وجود دارند، نشان داده شود. همین امر نقش آنتی ژنی این پروتئین را نسبت به دیگر آنتی ژنهای معروف این ویروس که هر ساله دچار تغییر می شوند و نسبت به داروهای مهار کننده مقاومت نشان می دهند، دو چندان می کند. کلون این ژن به کمک وکتور متعارف pqz57rt که نوعی taوکتور بی نیاز از آنزیم برشی است، در سویه dh5? از باکتری ای کولی انجام پذیرفت. این روش چنانچه باکتریهای کلون شده در شرایط انجماد استاندارد قرار بگیرند امکان نگهداری نامحدود کلونیها را فراهم می کند و از طرفی تکثیر مجدد باکتریها و استخراج ژن از آنها را به سادگی امکان پذیر می سازد. در انتها نیز با انتقال این ژن به یک وکتور دیگر بنام pegfp-n1 که نوعی وکتور بیانی است و قادر به ترجمه ژن در سلولهای پستانداران می باشد، مقدمات لازم برای تولید پروتئین این ژن ایجاد گردید.