بررسی مکانیسم عمل chir99021در تولید سلولهای بنیادی پرتوان جنسی از سلولهای بیضه ای موش نوزاد

مقدمه: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی مسئول حفظ اسپرماتوژنز در طول حیات جنس مذکر می باشند . مطالعه این سلول ها از دو جهت دارای اهمیت می باشد: 1) دانش پایه ما در ارتباط با این سلول ها با توجه به اهمیت این سلول ها بسیار کم است و2) از طرفی پتانسیل این سلولها برای استفاده درکاربردهای پزشکی از جمله سلول درمانی و برگرداندن قدرت باروری و بسیاری موارد دیگراهمیت مطالعه این سلول ها را دو چندان می کند.گروهای مختلفی توانسته اند این سلولها را در آزمایشگاه در شرایط مختلف کشت داده و نگه داری کنند. بر اساس مطالعات انجام شده، در کشت سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی به صورت تصادفی و خود به خودی کلونی هایی شبه کلونی های سلولهای بنیادی جنینی متشکل از سلوهای شبه سلولهای بنیادی جنینی ظاهر می شوند که اعتقاد براین است که این سلولها پرتوان هستند امایکی از مشکلاتی که در گزارشات دیده می شود این است که بازده به دست آوردن این کلونی ها بسیار کم است . هدف: بر طبق مطالعات انجام شده در کشت وتولید سلولهای بنیادی جنینی با بازده بالا با استفاده از ریز مولکول chirدر ترکیب با دیگر ریز مولکولها, این ریزمولکول از طریق مهار gsk-3 و فعال کردن مسیرwntعمل میکند. اما هیچ گزارشی در مورد مکانیسم عملchirدر تولید سلولهای gpscs وجود ندارد. به همین دلیل مطالعه حاضر به بررسی مکانیسم عمل chir در تولید سلولهای gpscs از سلولهای بیضه ی موش نوزاد می پردازد. مواد و روشها : در این مطالعه ابتدا سلولهای بیضه ای موش نوزاد طبق پروتوکل مروجی و همکاران و همچنین درحضوردیگر مهار کنندهای gsk-3 مانند bio,kenpaulone به سلولهای بنیادی پرتوان جنسی(gpscs) تبدیل و سپس تعداد کلنیها در روزهای 4، 6،8 و12شمارش گردید. پس از آن از مهارکنندهای اجزاء کمپلکس تجزیه کننده ?-catenin شامل مهارکنندهای خو ?-cateninدرسطح سیتوپلاسم (xav939) و در سطح هسته(pnu74654) برای تشخیص اهداف پایین دست ?-catenin استفاده و تعداد کلنیها در روزهای 4، 6،8 و12شمارش گردید. سپس بیان ژنهای oct4، nanog، gfr?1، و plzf در سطح پروتئین با روش ایمونوفلورسنت بررسی گردید. همچنین با استفاده از تست tunnel نیز آپوپتوز در کلنی ها بررسی گردید. نتایج: در روز ششم اختلاف معنی داری بین گروه های chir+xav ، chir+pnu و chir+xav+pnu با گروه chir دیده شد. کلنی های روز چهارم و ششم که مد نظر ما بودند هیچ یک از ژنهای مختص پرتوانی یا سلولهای زایای بررسی شده را چه در سطح mrna و چه در سطح پروتئین بیان نمی کردند. بررسی آپوپتوز به صورت in situ هیچ گونه آپوپتوزی را نشان نداد. نتیجه گیری: براساس داده های ما تفاوت معنی داری درکلنی های روز ششم بین گروه های مورد مطالعه وجود داشت که نشان دهنده ی این است که chir از طریق مهار gsk-3? و فعال کردن ?-catenin عمل می کند. کلنی های تولید شده هیچ یک از ژنهای پرتوانی و ژنهای شاخص سلولهای زایای مورد بررسی قرار گرفته در این تحقیق را بیان نمی کنند بنابراین ماهیت این کلنی ها نامشخص می باشد. کلمات کلیدی: موش نوزاد، بیضه، سلولهای بنیادی پرتوان جنسی(gpscs)، chir، مکانیسم عمل