بررسی ایمنی زایی زیر واحد ساختاری فاکتور اتصال cs3 از باکتری etec

اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک علت اصلی اسهال درکشورهای در حال توسعه است. دو شاخص ویرولانس etec عبارت است از: کلونیزاسیون در روده ی کوچک و تولید انتروتوکسین ها. اتصال با واسطه ی آنتی-ژن های فاکتورهای کلونیزاسیون انجام می شود و پس از اتصال، باکتری یک یا چند انتروتوکسین تولید می کند و نتیجه ی این وقایع ترشح مایعات به صورت اسهال است. فیمبریه ی cs3 یکی از شایع ترین آنتی ژن های فیمبریال یافت شده در ایزوله های کلینیکی است. کلاستر ژنی مسئول بیوسنتز cs3 شامل ژن های csta-csth است. ثابت شده است که csth کدکننده ی زیرواحد اصلی فیمبریه است و نقش اساسی در اتصال باکتری به سلول های اپی تلیال روده ی کوچک دارد. این زیرواحد یک کاندید فرضی در توسعه ی واکسن محسوب می شود. بر اساس مطالعات اپیدمیولوژی و کلینیکی، بهترین کاندید واکسن برای etec، واکسنی است که شامل فاکتورهای کلونیزاسیون و هم چنین انتروتوکسین باشد. زیرواحد b توکسین حساس به حرارت که توسط بیشتر ایزوله های etec تولید می شود، در مقایسه با زیرواحد a این توکسین خصوصیات ایمنولوژیک بیشتری دارد. در مطالعه ی حاضر، ما یک پروتئین کایمر (csth-ltb) طراحی نموده ایم که می تواند به عنوان یک واکسن کاندید بر علیه این پاتوژن در نظر گرفته شود؛ به طوری که شامل هر دو عامل ویرولانس etec باشد. توالی ژن های کدکننده ی csth و eltb از بانک ژن به دست آمد و توسط نرم افزارهای بیوانفورماتیکی اپتیمایز شد. توالی ژن کایمر با اتصال این دو توسط لینکری مناسب ساخته شد. ژن سنتتیک که در وکتور puc57 سنتز شد، در وکتور pet28a زیرهمسانه سازی گردید. زیرهمسانه سازی با آنالیز برش آنزیم های محدودکننده تایید شد. بیان پروتئین نوترکیب در باکتری e.coli bl21de3 انجام و توسط وسترن بلات با آنتی بادی ضد his tag تایید شد. پروتئین های تخلیص شده برای تولید آنتی بادی به موش های سوری نژاد balb/c و خرگوش تزریق شد. تست الایزا با استفاده از سرم حیوان برای تعیین تولید آنتی بادی انجام گرفت. کارآمدی آنتی بادی توسط سنجش لوپ ایلئال خرگوش و اتصال به سلول های caco-2 تایید شد. آنالیزهای ایمنولوژیک تولید تیترهای بالای آنتی بادی اختصاصی را در حیوانات ایمن نشان داد. آنتی بادی ضد پروتئین کایمر، توانست به فیمبریه ی cs3 متصل و مانع از اتصال باکتری گردد. نتایج نشان می دهد پروتئین کایمر نوترکیب می تواند به عنوان یکی از مهم ترین اجزای واکسن علیه etec در نظر گرفته شود.