بیان اپی توپهای ایمنوژنیک گلیکوپروتئین ویروس تب خونریزی دهنده کریمه-کنگو در گیاهان تراریخت به منظور بررسی پاسخ ایمنی درحیوان آزمایشگاهی

بیماری تب خونریزی دهنده کریمه –کنگو (cchf) عفونت ویروسی کشنده ای با 50% مرگ و میر است که از طروق گزش کنه، خون و ترشحات آلوده دام وازراه تنفس به انسان سرایت می کند و عامل آن ویروسی از خانواده bunyaviridae و جنس nairovirus است. ویروس cchf دارای ژنوم rna تک رشته ای سه قطعه ای مشتمل بر قطعات s ، m ، l می باشد.قطعه s در حدود 1200 نوکئوتید نوکلئوکپسید، قطعه m در حدود 5100 نوکئوتید گلیکوپروتئین ویروس و قطعه l در حدود 12000 نوکئوتید نوعی پلیمراز را رمز می کنند. در این طرح تحقیقی مصمم شدیم که گلیکوپروتئین ویروس تب خونریزی دهنده کریمه-کنگو پس از بهینه سازی کدونی در مدل گیاهی بیان نموده و پس از حصول اطمینان از تراریختی و بیان آنتی ژن مورد نظر، چالش ایمنولوژیکی آن را در مدل حیوانی بررسی نمائیم. پس از آنالیزهای تائیدی گیاهان تراریخت مبنی بر بیان گلیکوپروتئین g1/g2 ، برگ گیاه تنباکو و بذر گیاه کلزا با دو راهبرد خوراکی و خوراکی/تزریقی برای ایمنی زایی موشهای آزمایشگاهی استفاده شدند. گروه موشهایی که واکسن تزریقی cchf که برای تزریق انسانی موجود می باشد بصورت تزریقی دریافت نمودند به عنوان شاهد مثبت و گروهی که گیاه غیر تراریخت را که فاقد گلیکوپروتئین می باشد دریافت نکردند شاهد منفی می باشند. لازم به ذکر است که گلیکوپروتئین g1/g2 با روش آگروفیلتراسیون در برگ گیاه تنباکو بیان و با روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص گردید و بعنوان آنتی ژن در تزریق به موشها و آزمونهای الایزا و وسترن بلات استفاده گردید. تمام موشهای ایمن افزایش قابل توجهی از آنتی بادی های igg و iga را به ترتیب در سرم و مدفوع نشان دادند. موشهای خوراکی/تزریقی بعد از دریافت وعده تزریقی آخر از گلیکوپروتئین g1/g2 تخلیص یافته از گیاه، افزایش چشمگیری در آنتی بادی igg سرم نشان دادند. همانطورکه نتایج نشان می دهند ایمنی زایی موشها با گیاهان تراریخت به روش خوراکی امکان پذیر بوده و لذا ارزیابی های بعدی نظیر بررسی ایمنی زایی در دامها، بررسی ایمنی سلولی، انجام تست خنثی سازی ویروسی در آزمایشگاههای سطح 4 ایمنی زیستی برای ارزیابی چالش و سنجش گلیکانهای گلیکوپروتئین g1/g2 تولید شده در گیاه در مراحل بعدی در دست انجام می باشد.