محافظت از آمینو اسیدها به وسیله پوشش دهی با پلیمرهای طبیعی

آمینو اسیدهای ضروری که بدن قادر به تولید آنها نیست باید از طریق غذا وارد بدن شوند این اسید آمینه ها ممکن است در معده از بین بروند و به محل جذب خود در روده کوچک نرسند. پس در این پروژه هدف محافظت از آمینو اسیدهای ضروری(متیونین و لئوسین) در محیط معده است.در این پروژه آمینو اسید ها را توسط پلیمر طبیعی کیتوسان پوشش دهی(محافظت) کردیم. در محیط اسیدی کیتوسان پروتن می گیرد و دارای بار مثبت می شود. هر چند این بار مثبت می تواند با آمینو اسید که دارای گروه کربوکسیل با بار منفی می باشد پیوند الکتروستاتیکی برقرار کند اما وجود یک لایه چربی بر روی آمینو اسید که آن نیز گروه کربوکسیل دارد سبب تقویت بار منفی می شود.پس برای اینکه آمینو اسید را در لایه ای از چربی محبوس کنیم توسط دو مبرد و یک بالن ته گرد سیستمی تشکیل دادیم که مبرد بالایی با آب داغ با دمای ?c55 گرم شد در حالیکه مبرد پایینی با استفاده از آب ?c5 خنک می شد.چربی و آمینو اسید با نسبت (w/w 1:5) تا ?c55 حرارت داده شد تا شرایط ذوب و اختلاط آن فراهم گردید.سپس مخلوط چربی و آمینو اسید با استفاده از سرنگ به ساختار انتقال داده شد. این ذرات در مبرد بالایی ذوب می شدند و در مبرد پایینی دوباره منجد شده پس ذرات آمنو اسید در چربی محبوس شدند. سپس ذرات چربی محبوس کننده آمینو اسید با آب یخ دیونیزه شسته و در دمای ?c4 خشک شدند.بعد از خشک شدن ذرات آمینو اسید محبوس در چربی در مرحله بعد پوشش کیتوسان بر روی آمینو اسید قرار می گیرد به این ترتیب که یک محلول اسید استیک- کیتوسان آماده کردیم. کیتوسان در شرایط اسیدی پروتن می گیرد و دارای بار مثبت می شود سپس ذرات چربی محبوس کننده آمینو اسید در محلول اسید استیک- کیتوسان پخش شدند بار منفی کربوکسیل در چربی با بار مثبت در پلیمر کیتوسان پیوند الکتروستاتیکی برقرار می کند و بعد ذرات پاشیده شده بتدریج در محلول naoh یک یا 5 نرمال غوطه ور شدند و بعد از یک ساعت هم انباشتگی بروی سطح ذره انجام شد.در محلول سود ذرات تجمع پیدا کردند در نتیجه آمینو اسید راحتتر با کیتوسان پوشش دهی می شود. ذرات دارای پوشش کیتوسان حاصل جمع آوری و با آب دیونیزه شسته و در دمای ?c 20 خشک شدند. . سپس آنها را در شرایط آزاد سازی در معده قرار می دهیم ،برای این منظور 1/0 گرم از ذرات (آمینواسید محبوس در چربی یا آمینو اسید پوشش دار شده با کیتوسان در محلول سود یک نرمال ویا آمینو اسید پوشش دار شده با کیتوسان در محلول سود5 نرمال) را در 100 سی سی بافر فسفات با 5/5 ph= قرار می دهیم، سپس مخلوط را بر روی هیتر-همزن قرار می دهیم و دما را به ?c40 می رسانیم و چرخش مخلوط را در حدود 100 دور در دقیقه تنظیم می کنیم تا شرایط معده را شبیه سازی کنیم. برای تعیین غلظت آمینو اسید از روش ناین هیدرین استفاده می شود در حالیکه ذرات در شرایط فوق(شرایط معده) قرار می گیرد در فاصله های زمانی یک ساعت مقدار یک میلی لیتر از نمونه را بر می داریم و به آن 4 سی سی از محلول شناساگر ناین هیدرین(2 گرم ناین هیدرین را در 40 میلی لیتر از اتانول 96% حل کردیم)اضافه می کنیم سپس محلول ها سانتریفیوژشدند. و جذب آن ها توسط دستگاه uv-vis در طول موج nm568 اندازه گیری شد.از آنجا که آمینو اسید متیونین و لئوسین(دو آمینو اسید ضروری) ساختار مشابهی دارند نتایج یکسانی حاصل شد.به طور کلی زمانی که آمینو اسید تنها با چربی پوشش دهی می شود در شرایط معده به سرعت آزاد می شوند ولی زمانی که آمینو اسید دارای پوشش کیتوسان است تا 90 درصد نیز در ساعت اولیه محافظت می شوند و در شرایط معده آزاد نمی شوند و به روده می رسند تا جذب بدن شوند. دلیل آنرا می توان مربوط به پیوند سخت کیتوسان بر روی چربی که آمینو اسید را محبوس ساخته دانست .و همچنین دریافتیم که غلظت سود در نتایج آزمایش تاثیر چندانی ندارد.