بررسی تاثیر آنتی ژن های لایه ی زایای کیست هیداتید بر بیان ژن های tlr2 و tlr4 در سلول های تک هسته ای خون محیطی گوسفند سالم(بره های تازه متولد شده) با روش real-time quantitative pcr (qpcr)

اکینوکوکوزیس یکی از مهم ترین بیماری های زئونوز در سراسر جهان و از جمله ایران است که به طور جدی بهداشت عمومی را تهدید می کند. این انگل در انسان ها و حیوانات اهلی سبب کیست هیداتید می شود. اثر کیست هیداتید بر میزبان واسط بستگی به اندازه و محل کیست دارد. پاسخ های سیستم ایمنی ذاتی اولین سد دفاعی بدن میزبان در مقابل آنتی ژن های خارجی است.در سالیان اخیر اهمیت پاسخ های سیستم ایمنی ذاتی در شناسایی آنتی ژن ها و تکوین پاسخ های محافظتی ایمنی اکتسابی، به علت کشف گیرنده های شناسایی الگو (prrs)بیش از پیش مورد توجه قرار گرفته است. گیرنده های شبه تول(tlrs) شاخص ترین و مهم ترین prrs می باشند که توسط سلول های مختلف سیستم ایمنی بیان گردیده و در شناسایی الگو های مولکولی وابسته به پاتوژن ها(pamps) نقش دارند. با توجه به نقش احتمالیtlrs در شناسایی آنتی ژن های کرمی و پاسخ های ایمنی در مقابل بیماری های کرمی، ما در این بررسی به تاثیر آنتی ژن های لایه زایای کیست هیداتید گوسفند بر میزان بیان ژن های tlr2 و tlr4 در سلولهای تک هسته ای خون محیطی (pbmcs) بره های سالم پرداختیم. در این مطالعه ابتدا جمع آوری کیست هیداتید از کشتارگاه، سپس استخراج آنتی ژن های لایه زایای کیست هیداتید و تعیین غلظت آنها به روش برادفورد انجام گرفت. سپس، سلول های تک هسته ای خون محیطی (pbmcs)بره های سالم کمتر از یک ماه با روش فایکول جداسازی گردید. پس از آن، لنفوسیت ها و منوسیت های استخراج شده در محیط کشت سلولی با غلظت های 50 و 100gµ(گروه تیمار) و بدون آنتی ژن (گروه کنترل) به مدت 2ساعت و 18 ساعت کشت داده شدند. سپس استخراج rna تام از pbmcs انجام گرفته و سنتز cdna با استفاده از پرایمر های oligo-dtصورت پذیرفت. در نهایت تغییرات میزان بیان tlr2 و tlr4 نسبت به ژن کنترل داخلی gapdh با روش quantitative pcr real-time comparative انجام گرفت. آنالیز نتایج حاصله از این مطالعه نشان داد که بیان ژن tlr2 و tlr4در گروه تیمار نسبت به کنترل، افزایش یافته که این افزایش بیان ژن در مورد tlr4 بیشتر بود. نتایج حاصل از این مطالعه در شناسایی عمیق تر مکانیسم های سلولی مولکولی دخیل در ایمونوپاتوژنز و تکوین راهکار های نوین پیشگیری از هیداتیدوزیس موثر خواهد بود.