تشخیص ویروس موزاییک کدوییان به وسیله واکنش rt-lamp

ویروس موزاییک کدوییان متعلق به خانواده bromoviridae و جنس cucumovirus است که دارای دامنه میزبانی وسیعی است و در سراسر دنیا، بخصوص مناطق معتدل ومرطوب، گسترش دارد. این ویروس از نظر خسارت زایی به محصولات جالیزی در ایران در درجه دوم اهمیت بعد از سفیدک سطحی کدوئیان قرار دارد. در این تحقیق امکان استفاده از روش rt-lampبرای شناسایی سریع و دقیق ویروس موزاییک خیار مورد بررسی قرار گرفت و همزمان کارآیی آن با سایر روش های معمول در شناسایی این ویروس مانند rt-pcr و روش های سرولوژیکی مقایسه شد. برای این منظور ابتداء با استفاده ازآزمون های سرولوژیکی (das-elisa) وجود ویروس در نمونه های آلوده تایید شد. سپسrna ویروس از برگ های تلقیح شده گیاه محک(توتون) و نیز گیاه میزبان (کدو) استخراج گردید. از rnaاستخراج شده برای تولید cdna و متعاقبا انجام واکنش rt-pcr استفاده شد. همچنین از rnaویروس و cdna به ترتیب برای انجام واکنشlamp rt-یک مرحله ای و دو مرحله ای استفاده شد. در ادامه فاکتور های دخیل در واکنش rt-lampمانند غلظت آنزیم، dntps و سایر اجزاء مورد نیاز برای واکنش بهینه سازی شد. نتایج این تحقیق نشان داد که تکنیکrt-lamp را می توان با موفقیت برای شناسایی ویروس cmvاستفاده کرد. این تکنیک در مقایسه با سایر تکنیک های معمول تشخیص ویروس، مانند rt-pcrدارای سرعت(4 برابر)، حساسیت ( حدود 100 برابر) و دقت بیشتری است و نیاز به تجهیزات گران قیمت مانند ترموسایکلر ندارد و تشخیص نمونه های مثبت به راحتی و تنها با مشاهده کدورت ایجاد شده در تیوب های حاوی قطعات cdna ویروس امکان پذیر می گردد.