کلونینگ و بیان پروتئین a استافیلوکوکوس اورئوس در ecoli

استافیلوکوکوس آرئوس یک باکتری کوکسی، گرم مثبت‏، کاتالاز مثبت، اکسیداز منفی، بی‏هوازی اختیاری و کوآگولاز مثبت است. این باکتری جزئی از فلور نرمال پوست و مخاط می‏باشد و بیش از 50 درصد افراد جامعه ناقلین استافیلوکوکوس آرئوس هستند. این باکتری می‏تواند منجر به عفونت‏های متعددی در انسان، نظیر عفونت‏های سطحی پوست همانند آبسه‏، ‏زرد زخم شود. استئومیلیت، آرتریت عفونی و آندوکاردیت نیز موارد دیگر ناشی از عفونت با این باکتری در انسان محسوب می‏شوند. این ارگانیسم همچنین عفونت‏هایی را در حیوانات ایجاد می‏کند که ورم پستان استافیلوکوکی مهمترین آنها می‏باشد. عوامل متعددی در بیماری‏زایی استافیلوکوکوس ‏آرئوس نقش دارند که پپتیدوگلیکان، اسید تیکوئیک ، کوآگولاز، کپسول، توکسین‏ها و آنزیم‏های ترشحی و پروتئین a استافیلوکوکوس آرئوس از مهمترین آنها محسوب می‏شوند. spa قسمت سطحی اغلب سویه‏های استافیلوکوکوس آرئوس را می‏پوشاند که با اتصال‏های کووالانت به لایه پپتیدوگلیکان متصل می‏شود. پروتئین a در واقع به‏عنوان یک فاکتور حدت برای استافیلوکوکوس آرئوس محسوب می‏گردد، زیرا با استفاده از این پروتئین، باکتری قادر می‏باشد ملکول‏های igg چندین گونه حیوانی را از طریق قسمت fc به خود جذب کرده و ضمن فرار از پاسخ ایمنی، در برابر فاگوسیتوز نیز مقاومت نماید. وزن مولکولی این پروتئین 42000 دالتون می‏باشد و از 5 دومینa ،b ،c ،d ،e با قابلیت اتصال به ایمنوگلوبولین‏ها به خصوص igg تشکیل شده است. اتصال پروتئین a می‏تواند از طریق پذیرنده fc(منطقه ثابت زنجیره سنگین مولکول igg که فعالیت‏های بیولوژیکی آن را باعث می‏شود) و یا از طریق قسمت fab (منطقه‏ای از igg که مسئول شناسایی آنتی‏ژن است) صورت پذیرد. توانایی بالقوه و اتصال اختصاصی و انتخابی پروتئین a به تحت واحدهای ایمنوگلوبولین‏ g باعث شده است که این پروتئین در موارد بسیاری در تکنیک‏های کیفی و کمی ایمنولوژیکی مورد توجه محققین قرار گیرد. از واکنش پروتئین a با قسمت fab ایمونوگلوبولین g می‏توان به منظور تهیه کونژوگه و استفاده در فعالیت‏های ایمنولوژیکی مانند elisa و ria (رادیوایمونواسی)، ifa(ایمونوفلورسانس)‏، ایمنوهیستوشیمی، دات بلات و وسترن بلات استفاده نمود. همچنین از ویژگی اتصال spa به بخش fc آنتی‏بادی می‏توان به طور گسترده در خالص‏سازی آنتی‏بادی‏های مونوکلونال و پلی‏کلونال استفاده کرد. هدف از این تحقیق کلونینگ و بیان ژن سازنده spa در باکتری اشریشیا‏کلی و استفاده کاربردی این پروتئین در مطالعات آینده می‏باشد.