بررسی چند شکلی ژن های cast، capn و mstn به کمک تکنیک های pcr-rflp و pcr-sscpو ارتباط آنها با وزن یکسالگی در گوسفند زل

هدف از این تحقیق شناسایی چند شکلی ژن های کالپاستاتین، کالپاین و میوستاتین در یک گله گوسفند زل با روش های pcr-rflp و pcr-sscp و بررسی ارتباط آن ها با رکوردهای وزن یک سالگی بود. کالپاین شروع کننده تجزیه پروتئین بعد از کشتار است و کالپاستاتین مهم ترین مهارکننده و تنظیم کننده فعالیت کالپاین است. میوستاتین مهارکننده رشد ماهیچه های اسکلتی می باشد و جهش در ژن کد کننده آن، باعث افزایش عضله می شود. لذا با توجه به اهمیت زیاد آن ها هر سه به عنوان ژن های کاندید کنترل کننده صفات رشد انتخاب شده اند. در این تحقیق نمونه های خون از 200 رأس گوسفند زل تهیه و از روش نمکی بهینه یافته برای استخراج dna استفاده شد. واکنش زنجیره ای پلیمراز جهت تکثیر یک قطعه 622 جفت بازی شامل اینترون و اگزون اولین دامنه تکراری ژن کالپاستاتین، یک قطعه 190 جفت بازی ژن کالپاین شامل قسمتی از اگزون 5 و6 و اینترون مابین آن ها و قطعات 337، 222 و 311 جفت بازی به ترتیب شامل بخشی از اگزون3، اینترون1 و اینترون2 ژن میوستاتین انجام گرفت. در تحقیق حاضر چندشکلی ناحیه تکثیر شده ژن کالپاستاتین با هر دو روش فوق بررسی شد. در مورد روشrflp، قطعه تکثیر شده ی این ژن ، به طور جداگانه توسط دو آنزیم رستریکتاز mspi و ncoi مورد هضم قرار گرفت و دو آلل m و n به ترتیب با فراوانی های 855/0 و 145/0 شناسایی شدند. به کمک روش sscp، آلل های a، b و c به ترتیب با فراوانی های 835/0، 145/0 و 020/0 مشاهده گردید. در مورد ژن کالپاین صرفا از روش pcr-sscp استفاده شده است. در نتیجه تک رشته ای کردن ناحیه مورد مطالعه ژن کالپاین با بافر sscp، آلل های a و b به ترتیب با فراوانی های 845/0 و 155/0 مشاهده گردید. در این بررسی فراوانی های ژنی و ژنوتیپی ژن میوستاتین در3 ناحیه مختلف با روش های pcr-rflp و pcr-sscp بررسی شده است. اگزون3 با روشrflp و به کمک آنزیم haeiii و اینترون1 و 2 با روش sscp مورد مطالعه قرار گرفت. در روشrflp، همه نمونه ها با آنزیم haeiii مورد هضم قرار گرفتند و همگی ژنوتیپ mm را نشان دادند. ناحیه اینترون 1 این ژن نیز مونومورف بوده و همه نمونه ها ژنوتیپ هموزیگوت را نشان دادند. بررسی ناحیه اینترون2 ژن میوستاتین، وجود چندشکلی را در این جایگاه نشان داد و آلل های a و b با فراوانی های به ترتیب 755/0 و 245/0 به دست آمد. نتایج بدست آمده وجود تعادل هاردی واینبرگ را فقط برای ژن کالپاستاتین در روشsscp نشان داد (05/0p). متوسط هتروزیگوسیتی در همه جایگاه ها پایین بود (25/0 تا 37/0) که حاکی از بالا بودن هموزیگوسیتی در گله می باشد. جهت بررسی ارتباط چندشکلی ژن های مورد نظر با وزن یک سالگی گوسفندان مورد مطالعه از رویه glm نرم افزار sas استفاده شد. نتایج نشان داد که فقط بین ژنوتیپ های ژن کالپاین و وزن یک سالگی ارتباط معنی داری وجود داشت و حیوانات با ژنوتیپ ab وزن بیشتری نسبت به حیوانات با ژنوتیپ aa داشتند (01/0p<).