بررسی نسخه برداری بیان ژن های مولد سلولاز در تعدادی از قارچ های تجزیه کننده سلولز

سلولز مهمترین پلی ساکارید دیواره سلولی و یکی از فراوانترین هیدروکربن های موجود در طبیعت است و در حدود 40% از توده زنده گیاهی را تشکیل می دهد.آنزیم های سلولوتیک به صورتی از سه گروه آنزیمی و به صورت سینرژیستی با همدیگر عمل می کنند و در شرایط هوازی می توانند پیوندهای گلیکوزیدی بتا 1و4 رادر سلولز هیدرولیز نموده و آن را به دی اکسید کربن و آب و در شرایط غیر هوازی به دی اکسید کربن، متان و آب تبدیل نماید. این آنزیم ها عبارتند از: 1-4-?-d- گلوکانازها یا اندوگلوکاناز(eg, ec 3.2.1.4) ، 1-4-?-d- گلوکان یا اگزوکلوکانازها(cbh, ec.3.2.1.91) ، 1-4-?-d- گلوکوزیدها (?glc, 3.2.1.21) می باشد. در این تحقیق گونه های فعال قارچی در تجزیه سلولز در محیط cmc و با معرف آرسنات مولیبدات توسط اسپکتوفتومتر مورد ارزیابی فعالیت سلولازی قرار گرفتند. 4 ایزوله برترtrichoderma longibrachiatum ,trichoderma viride ,aspergillus terreus penicillium oxalicum بر اساس سوبسترا مورد استفاده برای ردیابی و توالی یابی ژن بتا1و4 اندوگلوکاناز، استفاده شدند. استخراج rna و dna به ترتیب توسط کیت گوانیدین ایزوتیوسیانات و روش ctab انجام گرفت، سپس ژن های تکثیر شده توالی یابی شدند و آنالیز های بیوانفورماتیکی بر روی توالی ژن و ترجمهء اسیدآمینه آنها انجام شد. توالی ها دارای همولوژی بالا حدود %97 تا%98 با توالی همین ژن در گونه مورد نظر خودشان در بانک اطلاعاتی ncbi بودند و برای هر ایزوله دو دومین در پایگاههای اطلاعاتی مشخص شد و پروسایت های هر کدام نیز تعیین گردید. وزن ملکولی پروتئین حاصل، نقطه ایزوالکتریک پروتئین و نواحی هضم آنزیمی در توالی های مورد مطالعه تخمین زده شد .بر اساس نتایج همردیفی اسید های نوکلوئیک (توالی ژن) و اسیدهای آمینه (توالی پروتئین) مشخص است، ژن های توالی یابی شده مربوط به بتا 1و4 اندوگلوکاناز یاeg1 می باشند و از آنالیزهای دومین و توالی های حفاظت شده و پروسایت ها (دومین ها و پروسایت های ثبت شده در بانک های اطلاعاتی مربوط از توالی پروتئینی می باشند و مربوط به ژن های فعال هستند) مشخص است که cds های توالی یابی شده مربوط به پروتئین های فعال می باشند.