ساخت وکتور دوگانه برای بیان آنتی سنس ژن mdsoc1a

چکیده: سیب یکی از میوه هائی است که به خاطر داشتن ارزش غذائی بالا و ترکیبات آنتی اکسیدانتی و رنگیزه های مفید از جمله کارتنوئید ها و آنتوسیانین ها در بین درختان میوه از جایگاه ویژه ای برخوردار می باشد و هر گونه بهبود در کیفیت و یا کمیت این گیاه دارای ارزش اقتصادی بسیار می باشد. بر خلاف گیاهان علفی، در درختان میوه مانند سیب روند اصلاح به خاطر طولانی بودن فاز نونهالی بسیار دشوار است، بنابراین از بین اهداف اصلاحی سیب کوتاه کردن طول دوره نونهالی در درجه اول اهمیت قرار دارد. درک مکانیسم القاء و تکوین گل برای دستکاری صفت طول دوره نونهالی لازم و ضروری است. mdsoc1a ژنی از ژن های احتمالی در گیر در گلدهی سیب است که تعیین نقش دقیق آن مستلزم فوق تظاهر و خاموش کردن آن در گیاهان مدل و سیب میباشد. در این پژوهش هدف ساختن سازه مناسب برای خاموش کردن ژن mdsoc1a می باشد. بدین منظور، توالی ژن جدا شدهmdsoc1a ، با استفاده از آغازگرهای دارای توالی اضافی برای دو سایت برشی در دو انتها از حامل pnm103 توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر شد و قطعه حاصل در حامل pgem-t easy به منظور تسهیل فرآیند هضم همسانه سازی شده و منجر به ایجاد یک سازه جدید با عنوان pnm107 گردید. سپس قطعه هضم شده با saci-bamhi به همراه ژن مورد نظر در جهت آنتی سنس در یک سازهی دوگانه تازه طراحی شده با عنوان pnm106 همسانه سازی و در نهایت نام pnm109 به آن اختصاص داده شد. واکنش colony pcr و تجزیه و تحلیل نقشه برشی نشان داد که همسانه سازی ژن به درستی صورت گرفته است. در نهایت سازه pnm109 به اشرشیاکلی سویه dh5? و بعد به agrobacterium tumefaciens سویهagl1 انتقال یافت.