غربالگری، جداسازی و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم کیتیناز مقاوم به دما حاصل از باکتری های بومی کشور

کیتین n(c8h13o5n ) دومین پلیمر مهم از نظر فراوانی درجهان است. کیتین از پیش ساز فعالudp-n- acetylglucoseamine به وسیله آنزیم کیتین سینتاز، سنتز می شود. مقدار کیتین از سخت پوستان در کل محیط های دریایی 1560 میلیون تن تخمین زده شده است. اسکلت خارج سلولی سخت پوستان (پوسته خرچنگ، لابستر ومیگو) به طور متداول از اصلی ترین منابع زیستی کیتین می باشد. میکروارگانیسم ها اولین تجزیه کننده های کیتین در طبیعت می باشند که دارای منابع با ارزشی از آنزیم هایی با ویژگی های مطلوب و جدید برای استفاده های کاربردی از کیتین، کیتوالیگوساکاریدها و کیتوزان هستند. خالص سازی و تغییر شیمیایی کیتین مشکل می باشد از این رو شناسایی آنزیم های میکروبی تغییردهنده کیتین و توضیح فعالیت این آنزیم ها در تولید محصولات خاص از کیتین می تواند تسهیلاتی ایجاد کند. باکتری ها و قارچ ها سیستم هایی هستند که برای دپلی مریزاسیون، انتقال و متابولیسم کیتین و کیتوالیگوساکاریدها گسترش یافته اند. بنابراین غربالگری و جداسازی باکتری های تولید کننده آنزیم کیتیناز موجود در استخرهای پرورش میگو منجر به شناسایی باکتری cohnella sp.a01گردید. بهینه سازی محیط کشت باکتری در راستای افزایش تولید آنزیم کیتیناز با استفاده از روش آماری تاگوچی انجام گرفت. در این روش با آرایه متعامد l27 هشت فاکتور در سه سطح مطالعه شد. نتایج مطالعه نشان داد که هشت فاکتور دما، ph، inoculation، trace element، nh4no3، k2hpo4، nacl، chitin در سه سطح از آرایه متعامد l27 روش آماری تاگوچی استفاده شد. با توجه به 27 آزمایش انجام شده، اطلاعات بدست آمده با نرم افزارهای minitab 14 و spss آنالیز شد. آنالیز واریانس ( anova ) داده ها توسط نرم افزار spssنشان داد که سه سطح فاکتورهای inoculation، trace element، temprature و nacl در سطح احتمال 1% اختلاف معنی دار داشتند که نشان دهنده فعالیت-های متفاوت سه سطح فاکتورهای inoculation، temprature ، trace element و nacl نسبت به هم بودند. در شناشایی بیوشیمیایی آنزیم کیتیناز ph و دمای بهینه آنزیم 5 و 70 درجه سانتی گراد بدست آورده شد. آنزیم کیتیناز تولید شده به وسیله این باکتری .زمانیکه از کیتین کلوئیدی به عنوان سوبسترا استفاده گردید km محاسبه شده برای این آنزیمmg/ml 024/0 و vmax آن unit/min 67/4 بدست آمد.