ساخت سازه حاوی ژن tbid تحت کنترل پروموتر میدکاین و بررسی بیان آن در رده سلولی hepg2

سرطان کبد (hcc) یکی از سرطانهای شایع دنیاست که به علت کمبود راهکارهای درمانی مناسب آمار مرگ و میر ناشی از آن بسیار بالاست. امروزه ژن درمانی امیدهای تازه ای برای درمان این سرطان ایجاد کرده است. مزیت بزرگ ژن درمانی، هدفمند عمل کردن آن است یعنی میتواند راهکارهایی اتخاذ گردد که از طریق آن فقط سلولهای سرطانی از بین برود. میدکاین یک فاکتور رشد و تمایز است که در بسیاری از سرطانها دچار بیش بیان میگردد و hcc از جمل? این سرطانهاست. در تحقیق حاضر از پروموتر آن جهت کنترل بیان ژن پیش آپوپتوزی tbid در سلولهای سرطانی استفاده شده است. ژن tbid یکی از ژن های قدرتمند در القای آپوپتوز از مسیر میتوکندریایی است که به تازگی به عنوان ترنسژن کشنده در ژن درمانی سرطانها مورد توجه قرار گرفته است. در این تحقیق ژن tbid با روش rt-pcr، از سلول های لنفوسیت انسان که این ژن را بیان میکنند، تکثیر و در وکتور pcdna3.1/hygro+ کلون شد تا ساز? pcmv-tbid حاصل شود. سپس پروموتر میدکاین با انجام slowdown hotstart pcr و در حضور 10% گلیسرول تکثیر و در ساز? فوق جایگزین پروموتر cmv گردید تا ساز? pmk-tbid به دست آید. سازه های حاصل به رده های سلولی سرطان کبد(hepg2) و نرمال فیبروبلاستی (ag01522) منتقل و بیان ژن tbid در این سلولها با روش rt-pcr و مرگ و میر سلولها با شمارش سلولی بررسی شد. نتایج نشان داد که ژن tbid تحت کنترل پروموتر میدکاین در سلولهای hcc افزایش بیان قابل توجهی و حتی بالاتر از cmv نشان میدهد، در حالیکه در رد? سلولی نرمال بیان کمی دارد. ضمن اینکه آمار مرگ و میر سلولهای سرطانی که ساز? pmk-tbid. رادریافت کرده اند، بیش از سلولهایی است که pcmv-tbid را گرفته اند، و حال آنکه در رد? نرمال سلولهای بسیار کمتری در اثر ساز? pmk-tbid نسبت به ساز? pcmv-tbid از بین رفته اند.