عنوان: مطالعه آمیلازهای دستگاه گوارش سن ( aelia acuminatahemiptera:pentatomidae)

سنaelia acuminata یکی از آفاتی است که همه ساله خسارات زیادی را به مزارع گندم وارد می آورد. گندم به عنوان یکی از مهمترین محصولات در کشور ما، جایگاه ویژه ای در کشاورزی دارد. از این رو مطالعه جنبه های مختلف زیستی این آفت به منظور برنامه ریزی جهت کاهش سطح خسارت امری بسیار ضروری است. در این پروژه آنزیم آلفاآمیلاز در دستگاه گوارش(معده میانی و غده بزاقی) سن a. acuminata بررسی شد. آلفاآمیلازها، هیدرولیز پیوند d(1,4 )glucan-? را درترکیبات نشاسته، گلیکوژن و سایر کربوهیدرات های وابسته انجام می دهند. این آنزیم در موجودات زنده ای که روی مواد غذایی غنی از پلی ساکارید زندگی می کنند، به فراوانی یافت می شود و نقش کلیدی در متابولیسم کربوهیدرات ها در موجودات زنده دارد. در این پروژه، حشرات بالغی که جمع آوری شده بودند در آزمایشگاه فیزیولوژی روی گندم پرورش یافتند. سپس این حشرات به طور تصادفی انتخاب و پس از تشریح شدن، غده بزاقی و معده آنها از بدن جدا شد و درون میکروتیوب های جداگانه قرار گرفت. فعالیت این آنزیم برای حشرات در حال تغذیه، در معده میانی و غده بزاقی اندازه گیری شد. به این صورت که فعالیت ویژه معده میانی u/mg protein 21/1 و غده بزاقی u/mg protein 56/1 به دست آمد. اندازه گیری فعالیت در 4 قسمت معده میانی نیز انجام شد .نتایج نشان داد که فعالیت قسمت اول: protein u/mg 56/0، قسمت دوم: u/mg protein 73/0، قسمت سوم: u/mg protein 74/0 و قسمت چهارم: u/mg protein 11/0 بود. ph و دمای بهینه به ترتیب : 5/4 و 40 درجه سلسیوس برای معده و 6 و 45 درجه سلسیوس برای غده بزاقی به دست آمد. پایداری دمایی و پایداری ph نیز اندازه گیری شد. تاثیر بازدارنده ها و فعال کننده ها نیز در این پروژه بررسی شد و داده ها نشان داد: کلرید سدیم و کلریدپتاسیم هم روی معده و هم روی غده بزاقی تاثیر فعال کنندگی دارند. سدیم دودسیل سولفات به شدت بازدارنده است. کلریدکلسیم وکلریدمنیزیوم نیز تاثیر بازدارندگی نشان دادند. ترکیبات اوره، تریس و تریتون، در همه غلظت های خود تاثیر بازدارندگی را به وضوح نشان دادند. تعیین ph در 4 قسمت مختلف معده میانی با استفاده از نشانگرهای رنگی نیز انجام شد و ph به ترتیب برای قسمت اول: 3/0±17/6 قسمت دوم: 2/0 ± 6، قسمت سوم: 2/0 ± 6 و قسمت چهارم: 02/0 ± 07/6 به دست آمد. الکتروفورز به دو روش denaturing و non-denaturing در این پروژه انجام شد. در روش اول آنزیم حرارت دیده بود و با کوماسی بلورنگ آمیزی شد و باندها به صورت نوارهای آبی رنگ نمایان شد. در حالت دوم که آنزیم فعال بود، فعالیت آلفاآمیلاز در به صورت لکه های روشن در بین زمینه تیره ای که با لگول رنگ آمیزی شده بود، مشخص شد.