همسانه سازی ژن گاما-توکوفرول متیل ترانسفراز از بافت میوه گوجه فرنگی (lycopersicum esculentum)

آلفاتوکوفرول ویتامین محلول در چربی و همچنین آنتی اکسیدانتی است که تنها در موجودات فتوسنتز کننده تولید می شود. آلفاتوکوفرول فعالیت ترین شکل بیولوژیک ویتامین e در بدن انسان است که مصرف آن بیش از مقدار توصیه شده ی روزانه با کاهش نرخ وقوع برخی از انواع سرطان، بیماری های قلبی عروقی و بیماری های کشنده ی انسان همبستگی دارد. روغن های گیاهی که مهمترین منبع تأمین ویتامین ای به شمار می روند، حاوی مقدار بسیار کم آلفاتوکوفرول هستند، این در حالی است که مقدار گاماتوکوفرول یعنی همان پیش ماده ی بیوسنتزی آلفاتوکوفرول در آن ها بسیار بالا است. گاماتوکوفرول متیل ترانسفراز آخرین مرحله ی مسیر بیوسنتزی آلفاتوکوفرول را کاتالیز می کند و گاماتوکوفرول را به آلفاتوکوفرول تبدیل می کند. در این تحقیق همسانه سازی ژن گاماتوکوفرول متیل ترانسفراز ( ) انجام شد. بدین منظور rna ی کل از بافت میوه گوجه فرنگی رقم memory1 استخراج و سنتز cdna صورت گرفت. سپس از طریق واکنش pcrو با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن مذکور تکثیر شد و قطعه ای به طول 1089 bp بدست آمد. قطعه تکثیر شده و ناقل pbluescript (sk-) به کمک آنزیم برشی xbai هضم و پس از خالص سازی آن ها، واکنش اتصال به کمک آنزیم t4 انجام و ناقل نوترکیب ساخته شد. در ادامه باکتری e.coli مستعد با ناقل نوترکیب تراریخت شد و شناسایی کلونی های نوترکیب بر اساس آزمون سفید – آبی (در اثر فعالیت ژن lacz) صورت گرفت. در نهایت وجود ژن مورد نظر از طریق pcr و هضم آنزیمی تایید شد. همردیف سازی توالی نوکلئوتیدی و اسیدآمینه ای ژن هدف با توالی های ژن گوجه فرنگی ثبت شده در پایگاه اطلاعاتی genbank به میزان 99 % مشابهت نشان داد