کلون سازی و بیان هترولوگ ژن کیتیناز chis در باسیلوس سوبتیلیس و بررسی اثرات ضد قارچی روی برخی قارچ های بیماریزای گیاهی

در این پژوهش اثر ضد قارچی باکتری باسیلوس پومیلوس sg2 روی برخی از قارچ های بیماریزای گیاهی مورد بررسی قرار گرفت. به علت همزیستی این باکتری با ریزوکتونیا سولانی و هم چنین ناشناخته بودن این باکتری، ژن کیتیناز chis آن به همراه پروموترش توسط pcr از ژنوم باسیلوس پومیلوس sg2 تکثیر و قطعه تکثیر شده در شاتل وکتور pdhafb کلون گردید. پس از تأیید صحت ساختار، وکتور نوترکیب بوسیله ی آنزیم scai از حالت حلقوی خارج و به صورت خطی در آورده شد. پلاسمید خطی شده به باکتری باسیلوس سوبتیلیس trpc2 منتقل و قطعه ژنی طی فرآیند نوترکیبی همولوگی به جای ژن آمیلاز قرار گرفت. بیان پروتئینchis با روش sds-page و آنالیز وسترن بلات تأیید و میزان فعالیت آنزیم با روش میلر اندازه گیری شد. در نهایت آنزیم تولید شده از باکتری نوترکیب با آمونیم سولفات رسوب داده شد و پس از حل شدن در بافر مناسب برای تخمین فعالیت آنزیم و بررسی اثر ضد قارچی پروتئین نوترکیب بر روی برخی قارچ های بیماریزای گیاهی مورد بررسی قرار گرفت. اثر ضد قارچی باسیلوس سوبتیلیس نوترکیب روی ایزوله های قارچی نیز آزمون شد. نتایج نشان داد آنزیم بیان شده در باسیلوس سوبتیلیس توانست جلوی رشد ریزوکتونیا سولانی، اسکلروتینیا اسکلروتیوروم، فوزاریوم گرامیناروم را بگیرد و این نشان می دهد علاوه بر بیان پروتئین در سیستم باسیلوس سوبتیلیس، پروتئین دارای فعالیت کیتینازی بر روی دیواره ی این قارچ ها می باشد. از طرف دیگر بررسی اثر ضد قارچی باکتری باسیلوس سوبتیلیس upchi در برابر این سه قارچ نشان داد که این باکتری تنوانست از رشد این قارچ ها جلوگیری کند.