اتصال آفلاتوکسین m1به آلبومین و هموسیانین وتهیه آنتی بادی پلی کلونال علیه آن

آفلاتوکسین ها گروهی از متابولیتهای کارسینوژن هستند که به وسیله قارچهای سمی آسپرژیلوس فلاووس و آّسپرژیلوس پارازیتیکوس تولید می شوند و با آلوده کردن مواد غذایی باعث ایجاد بیماریهای حاد و مزمن در انسان و حیوانات می شوند. تشخیص آفلاتوکسین ها به روش الایزا که از دقیقترین روشها برای اندازه گیری این نوع سموم می باشد نیازمند تهیه مشتقات آفلاتوکسین با پروتئین است. در این مطالعه آفلاتوکسین m1 به آلبومین گاوی (bsa) متصل و کونژوگه آن تهیه گردید. سپس آنتی بادی ضد این کونژوگه در خرگوش تهیه شد. برای تهیه کونژوگه آفلاتوکسین m1 با آلبومین گاوی ابتدا آفلاتوکسین m1 در یک شرایط ملایم در مخلوطی از حلالهای پیریدین – متانول – آب در حضور o – کربوکسی متیل هیدروکسیل آمین همی هیدروکلراید برای تولید یک محصول واکنش پذیر با پروتئین ها که دارای یک گروه کربوکسیل آزاد می باشد رفلکس شد. محصول بدست آمده (آفلاتوکسین m1 - o – کربوکسی متیل اکسیم) بعد از تبخیر کردن حلال به وسیله روتاری در حضور یک کربو دی ایمید (edc) به bsa وصل شد. اتصال آفلاتوکسین m1 به o – کربوکسی متیل هیدروکسیل آمین همی هیدروکلراید با استفاده از کروماتوگرافی لایه نازک (tlc) روی پلیت سلیکاژل و همچنین با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تجزیه و تحلیل شد و اتصال آفلاتوکسین m1 - o – کربوکسی متیل اکسیم به آلبومین گاوی نیز با اسپکتروفتومتری uv-vis برسی شد. نتایج حاصل از این روش نشان داد که به هر مولکول bsa تقریبا" 12 مولکول آفلاتوکسین m1 متصل شده است. به منظور تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه آفلاتوکسین m1‏‏‏‏‏‏‏، ‏‏‏کونژوگه‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏‏ afm1- bsa به خرگوش تزریق شد و تیتر آنتی بادی حاصله با استفاده از الایزای غیر مستقیم تعیین شد. نتایج الایزا نشان داد که بعد از تزریق چهارم تیتر آنتی بادی مناسب است. آنتی بادی حاصله با استفاده از رسوب سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی تعویض آنیون تخلیص شد و سپس آنتی بادی ضد bsa با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی دارای لیگاند bsa از آنتی بادی علیه آفلاتوکسین m1 تفکیک گردید. سپس با استفاده از آنتی بادی حاصله روشی از الایزا برای اندازه گیری آفلاتوکسین m1 مورد بررسی قرار گرفت‏‏‏‏‏.