بیان افزایش یافته نسبی آلفا1-آنتی تریپسین در مخمر پیکیا پاستوریس و بسته بندی آن در ذرات نانو

آلفا 1- آنتی تریپسین (aat) گلیکوپروتئینی با 394 آمینواسید و حدود 54 کیلودالتون وزن مولکولی می باشد. این پروتئین فاز حاد با مهار آنزیم الاستاز نوتروفیلی، ریه را در مقابل اثرات تخریبی این آنزیم در مواقع التهاب محافظت می کند. تولید این پروتئین به طریقه نوترکیب سالهاست که مورد توجه شرکت های دارویی است. در میان انواع سیستم های تولید کننده، مخمر پیکیا پاستوریس به لحاظ انجام فرایند گلیکولیزاسیون، کم هزینه بودن، حجم بالای تولید و بهره گیری از وکتورهای بیانی مناسب به همراه پروموترهای قوی چون الکل اکسیداز از مزیت ویژه ای برخوردار است. از سویی بسته بندی این پروتئین دارویی در نانوذرات بیوپلیمر زیست سازگاری چون plga، به پایداری آن در محیط کمک کرده و رهایش آن را در شرایط فیزیولوژیک آزمایشگاهی کاهش می دهد. به این ترتیب نیاز بیمار به تزریق هفتگی دارو مرتفع و هزینه تحمیلی بر او کاهش می یابد. در این تحقیق ژن haat به وسیله وکتور بیانی ppicz?b به همراه پروموتر قوی الکل اکسیداز در مخمر پیکیا پاستوریس بیان شد. تولید پروتئین بوسیله sds-page ردیابی و کمیت آن با تست elisa بررسی گردید. از طرفی فعالیت این پروتئین بوسیله تست eic اندازه گیری شد. در مرحله بعد aat نوترکیب تولید شده به روش oiling-oil در نانوذرات plga بسته بندی و رهایش آن در طول 33 روز مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد بیان پروتئین از ساعت 48 قابل ارزیابی است و بالاترین میزان آن در ساعت 72 می باشد. میزان بیان در حدود 50 میکروگرم در میلی لیتر بوده و پروتئین نوترکیب تولیدی فعال می باشد. بازده بارگذاری حدود % 71 و بررسی ftir نمونه هیچ واکنشی را میان پلیمر و پروتئین نشان نداد و الگوی رهایش روندی کاملا منطقی و قابل انتظار داشت. بنابراین سیستم پیکیا پاستوریس می تواند جهت بیان آلفا 1- آنتی تریپسین فعال استفاده شود و بسته بندی آن در بیوپلیمر plga راه حل مناسبی جهت کاهش روند آزادسازی آن در محیط شبه فیزیولوژیک می-باشد.