غربالگری میکروارگانیسم های ترموفیل برای دستیابی به یک سوش باکتریایی تولیدکننده α آمیلار مقاوم حرارتی

نمونه های جدا شده از حوضچه های آبگرم محلات، مشکین شهر و لاریجان برای غربالگری بیوکاتالیزور مناسب واکنش هیدرولیز نشاسته، بر روی محیط نشاسته آگار در درجه حرارتc °65 بمدت 24 ساعت کشت داده شده وبا اضافه کردن معرف ید و تشخیص بیشترین هاله ایجاد شده، سویه ایزوله شده از حوضچه آبگرم مشکین شهر، بعنوان سویه برتر انتخاب شد. با انجام تستهای بیوشیمیایی، نتایج زیر بدست آمد: از نظر مورفولوژی کلنی، باکتری مورد نظر دارای کلنی های گرد با حالت موکوئیدی است. باسیل گرم مثبت، متحرک و دارای توانایی تولید اسپور می باشد. بی هوازی اختیاری بوده و کاتالاز مثبت و اکسیداز منفی است. توانایی احیائ نیترات به نیتریت را دارد. اوره آز و سیترات مثبت، اندول و sh2 آن منفی است. توانایی تخمیر قندهای گلوکز، گزیلوز، لاکتوز و آرابینوز را دارد. و قادر به استفاده از قند مانیتول نیست. بیشترین کدورت در محیط های دارای ph 5/5-5/6 و دماهای بین°c 50-80 دیده شد. همچنین این باکتری قادر به تحمل میزان نمک 1و2% می باشد. با بررسی بهینه سازی شرایط محیط کشت، مشخص شد که مناسب ترین دما و ph برای تولید آنزیم α-آمیلاز مقاوم حرارتی توسط سویه مورد نظر در حضور 1% نشاسته محلول در محیط کشت ، 70ᵅc و ph 6 ،می باشد و بهمین ترتیب بیشترین فعالیت کاتالیزوری ویژه آنزیم در حضور 1% نشاسته محلول در محیط کشت ،در درجه حرارت c °70 ،و ph 6 ، می باشد. با اضافه کردن mm 10ca2+ , 1% پپتون، و5/0% عصاره مخمر ،به محیط کشت پایه افزایشی هم در مقدار توده سلولی و هم در تولید آنزیم مشاهده شد. همچنین مشخص شد که با افزودن غلظت یونهای fe3+ و2+ cu فعالیت آنزیم مورد نظر کاهش پیدا می کند و بمدت 45 دقیقه در درجه حرارت °c 100 تغییر قابل ملاحظه ای در فعالیت انزیم مو.رد نظر ایجاد نمی شود. با انجام الکتروفورز در حضور سدیم دو دسیل سولفات تک باند با وزن مولکولی تقریبی56 kdمشاهده شدکه با مقایسه با باندهای حاصل از فعالیت آنزیم در ژل سنجش آنزیم شده، مطابقت داشت.