بیان ژن پروتئین پوششی ویروس تریستزای مرکبات در باکتری escherichia coli

ویروس تریستزای مرکبات( citrus tristeza virus ctv) مهمترین بیمارگر مرکبات می باشد و خسارت هنگفتی به صنعت تولید این محصول در دنیا وارد می کند. به دلیل گسترش و شیوع ctv در ایران، مدیریت کنترل آن اهمیت بسزایی یافته است. از این رو تشخیص به موقع، دقیق و ارزان بیماری نیاز به بکارگیری روشی مناسب دارد. امروزه روش( enzyme linked immunosorbant assay elisa) روشی معمول، معتبر و ارزان برای تشخیص ویروس در سطوح وسیع است. به منظور استفاده از این روش نیاز به تامین منبع آنتی ژن ویروسی برای استفاده در فرآیند تولید آنتی بادی پلی کلونال می باشد. در تحقیق حاضر ژن پروتئین پوششی ctv، (ctv-cp25) جدا شده از ایران که در ناقل ptz57r/t همسانه سازی شده بود با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر و در ناقل بیانی pet26b همسانه سازی گردید و pet-cp25 نامیده شد. دو سویه bl21 و rosetta gami (de3) باکتری escherichia coli، با pet-cp25 تراریخته شد و سویه تراریخته به مدت یک شب در محیط lb و دمای c°37 همراه با تکان رشد داده شد و پس از واکشت در روز بعد، بیان پروتئین پوششی با استفاده از iptg القاء گردید. سپس نمونه برداری در ساعات مختلف پس از القاء، انجام و پروتئین محلول تام استخراج و در sds-page تفکیک شد. پس از تایید بیان پروتئین نوترکیب، به منظور بررسی ماهیت آن، لکه گذاری وسترن با استفاده از آنتی بادی پلی کلونال اختصاصی پروتئین پوششی ویروس تریستزا (تهیه شده از شرکت dsmz آلمان) انجام گردید. نتایج این تحقیق نشان داد که پروتئین پوششی ctv در سلول باکتری بیان شده است