تولید نو ترکیب پروتئیناز 3 انسانی و بررسی خواص بیولوژیکی آن

پروتئیناز 3 یک نوتروفیل سرین پروتناز و به عنوان یک اتو آنتی نوتروفیل سیتوپلاسمیک اتوآنتی بادیها که در سرم افراد با بیماری گرانولوماتوز وگنر دیده می شود، می باشد. فرم خالص شده این پروتئیناز جهت مطالعه این بیماران بسیار حائز اهمیت است . در این تحقیق دو نوع pr3 انسانی بصورت نوترکیب تهیه شد. بخشی از pr3cdna که فرم فعال راکد می کند انتخاب و با انجام واکنش نسخه برداری معکوس و واکنش زنجیری پیوسته بر روی rna سلولهای u937 ، با پرایمرهای خاص cdna های مورد نظر تهیه گردید. به منظور اینکه pr3 های ساخته شده در محیط کشت ترشح شوند یک توالی علامت دهنده ترشحی در جلو cdna های pr3 اضافه گردید و سرانجام دو نوع توالی سیگنال ساخته شد. در یکی از آنها توالی سیگنال و pr3 مستقیما" به یکدیگر متصل شده اندspr3 و در دیگری 6 جفت باز اضافی بین s و pr3 وجود داردsapr3-spr3-(sapr3) در داخل وکتور بیان کننده pme18 کلون شدند و pme18-s-apr3-pme18-s-pr3 های حاصل در داخل e.coli الکتروپوریت گردیدند. بعد از جداسازی، تخلیص و مطمئن شدن از صحت توالیهای spr3 و sapr3 ، وکتورها در داخل cho-cells الکتروترانسفرم شدند. پس از 10 روز حضور پروتئینازهای نوترکیب (rapr3,rpr3) در محیط کشت تایید و فعالیتشان در برابر سوبسترای اختصاصی اندازه گیری شد. مقدار rpr3 و rapr3 در محیط کشت به ترتیب 10ng/ml و 12ng/ml بود. pr3 های نوترکیب دارای فعالیت آنزیمی بوده و هر دو همانند نوع طبیعی توسط c-anca شناخته می شوند.