استفاده از روشهای مهندسی ژنتیک برای دستیابی به فنوتیپ گیاهی مقاوم به شوری در گیاه arabidopsis thaliana (l.)

تراریختی گیاهان با واسطه اگروباکتریوم نه تنها وسیله ای مفید جهت وارد نمودن ژنهای خارجی در ژنوم گیاهان است بلکه اخیرا به منظور ردیابی و شناسایی ژنهای گیاهی نیز بکار رفته است . همچنین ثابت شده است که t-dna tagging و به ویژه activation tagging وسیله ژنتیکی قدرتمندی برای جدا کردن ژنهای ناشناخته در گیاه است . در این پژوهش از گیاه آرابیدوپسیس تالیانا که در تحقیقات ژنتیکی از ارزش فراوانی برخوردار است استفاده شد. بذرهای آرابیدوپسیس بر روی محیط b5 حاوی 2,4-d 2mgl-1 و kin 0.05mgl-1 به طور مستقیم تولید کالوس شکننده نمودند. از این کالوسها در محیط مایع حاوی و سوسپانسیون سلولی تهیه شد. سلولهای آرابیدوپسیس به کمک اگروباکتریوم تلقیح شدند ولی این سلولها باززایی نشدند و گیاهی حاصل نشد. برگهای آرابیدوپسیس تالیانا بر روی محیط ms حاوی bap 1mgl-1 و naa 0.1mgl-1 به مدت 2 روز پیش کشت گذاشته شدند و پس از دو روز برگها تراریخت شدند. این برگها بر روی محیط باززایی حاوی هایگرومایسین تولید کالوس نمودند و برخی نیز مستقیما جوانه زدند. از کالوسها جوانه ای حاصل نشد. جوانه های راسی دانه رستهای 12-14 روزه آرابیدوپسیس جدا شدند. این قطعات بر روی محیط ms حاوی bap 1.5mgl-1 و naa 0.1mgl-1 به خوبی رشد نموده و به گیاه کامل تبدیل شدند. این جوانه ها به کمک باکتری تلقیح شدند و آنهایی که ژن را دریافت نموده بودند بر روی محیط کانامایسین رشد نمودند ولی پس از مدتی این گیاهان از بین رفتند. این بافت نیز برای هدف این تحقیق مناسب شناخته نشد. ریشه های آرابیدوپسیس از گیاهان سه هفته ای جدا شدند و به مدت 4 روز بر روی محیط القا کالوس قرار گرفتند. این محیط حاوی نمکهای b5 و 2,4-d 0.5mgl-1 و kin0.05mgl-1 بود. پس از تلقیح قطعات ریشه با باکتری 2 روز دیگر نیز ریشه ها بر روی محیط القا کالوس قرار داده شدند و سپس به محیط القا جوانه که حاوی نمکهای b5 و bap 0.4mgl-1 و naa 0.2mgl-1 و هایگرومایسین بود منتقل شدند. بخشهای تراریخت شده ابتدا تولید کالوس سبز و سپس جوانه می نمودند. جوانه های حاصل پس از رشد و تبدیل به گیاه کامل برای بررسی مقاومت به شوری بر روی محیط ms حاوی 200mm کلریدسدیم منتقل شدند که تنها یک جوانه رشد نمود و به تنش شوری مقاومت نشان داد.