کلونینگ،بیان، تخلیص و بررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی پروتئین لیزوستافین اولیه در شرایط آزمایشگاهی

  سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس عامل طیف وسیعی از عفونت‌ها،از عفونت‌های پوستی تا انتشار آن وعفونت‌های سیستمیک منجر‌شونده به نارسایی ارگانی ومرگ می‌باشد.مقاومت دارویی در این گروه از پاتوژن‌ها یک نگرانی جهانی شده و نیازمند توسعه‌ی عوامل درمانی جدیداست. لیزوستافینیک نمونه از این عوامل می‌باشد،لیزوستافینیک باکتریوسین تولید‌شده به‌وسیله‌ی استافیلوکوک سیمولانس است که باعث کشتن سلول‌های استافیلوکوک اورئوس از طریق تخریب دیواره سلولی استافیلوکوک می‌شود.هدف از این مطالعه،بیان بالای لیزوستافین اولیه به شکل نوترکیب وبررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی آن بر علیه استافیلوکوک اورئوس تحت شرایط آزمایشگاهی می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه،ژن لیزوستافین از استافیلوکوک سیمولانس پس از تکثیر با استفاده از واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) در ناقل پلاسمیدیpET32a کلون وبیان شد. پروتئین بیان شده توسط کیتNi-NTA بر اساس کروماتوگرافی تمایلی تخلیص شد.فعایت آنتی‌باکتریال آن بر علیهیک سوسپانسیون سلولی از استافیلوکوک اورئوس با استفاده از روش کدورت‌سنجی مطالعه شد. یافته‌ها:نتایجPCR وتعیین توالی نشان داد که ژن هدف به درستی در ناقل مورد نظر کلون شده است. بیان پروتئین به‌وسیلهIPTG القا شد و غلظت‌های بالایی از پروتئین نوترکیب توسط رزین نیکل با فعالیت ضد استافیلوکوکی تخلیص شد.  نتیجه‌گیری:pET32aیک سیستم بیانی کارآمد در بیان پروتئین نوترکیب پیش‌ساز لیزوستافین در میزبان بیانیE.coli می‌باشد