همسانه‌سازی ژن آنزیم کلسترول‌اکسیداز سویه بومی ایرانی Rhodococcus sp. 502 در راستای تولید آفت‌کش بیولوژیکی پنبه

آنزیم کلسترول‌اکسیداز به­عنوان نسل جدیدی از آفت­کش­های بیولوژیک اثر آفت­کشی قوی بر روی آفت غوزه پنبه (Heliothis armigera) دارد. مکانیسم اثر کشندگی کلسترول‌اکسیداز مربوط به اکسیداسیون کلسترول در غشای اپیتیلیوم روده میانی حشرات می‌باشد که منجر به تخریب فیزیکی و ساختاری غشاء و در نتیجه ایجاد اختلالاتی در عملکرد غشاء و در نهایت سبب مرگ آفت می‌شود. تولید گیاهان مهندسی ژنتیک شده با ژن کدکننده آنزیم کلسترول ‌اکسیداز در جهت مقاوم‌سازی آن­ها به آفات، مستلزم انتخاب مناسب‌ترین سوش از نظر میزان بیان و فعالیت زیاد این آنزیم است. لذا این تحقیق با هدف همسانه سازی ژن آنزیم کلسترول‌اکسیداز در یک سیستم بیانی pET مناسب، جهت امکان هدایت پروتئین نوترکیب تولیدشده به فضای پری‌پلاسمی باکتری طراحی و اجرا شد. بدین منظور از ‌سویه باکتری (Rhodococcus sp. 502) بومی ایران، که دارای فعالیت کلسترول‌اکسیدازی بالا بود، جهت جداسازی ژن با PCR استفاده شد. محصول PCR ابتدا در پلاسمید خطی pJET و در نهایت در پلاسمید pET23a کلون و داخل میزبان (E.coli DH5α) ترانسفورم شد. پس از همسانه‌سازی و استخراج پلاسمید نوترکیب pET23a+cho و به‌منظور تأیید حضور ژن از آنزیم‌های HindIII و XhoI و تعیین توالی استفاده شده است. حضور باند 1600 جفت بازی در هضم آنزیمی  حضور ژن را تایید کرد. نتایج حاصل از آنالیز تعیین توالی حاکی از آن است که توالی به‌‌دست ‌آمده شباهت زیادی با کلسترول‌اکسیداز سویه‌های دیگر باکتری Rhodococcusموجود در NCBI دارد، که  از آن می‌توان در راستای تولید آفت‌کش بیولوژیکی در پنبه استفاده نمود.