‫ﻃﺮاﺣﯽ و ﺳﺎﺧﺖ ‪ BCG‬ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﺗﺮﺷﺢ ﮐﻨﻨﺪه ﭘﻠﯽﺗﻮپﻫﺎی وﯾﺮوس‬ ‫ﻫﭙﺎﺗﯿﺖ ‪ c‬ﺑﻪﻋﻨﻮان ﮐﺎﻧﺪﯾﺪای واﮐﺴﻦ‬

‫زﻣﯿﻨﻪ واﻫﺪاف: ﺑﯿﻤﺎری ﮐﺒﺪی ﻣﺮﺗﺒﻂ ﺑﺎ ﻋﻔﻮﻧﺖ ﻣﺰﻣﻦ وﯾﺮوس ﻫﭙﺎﺗﯿﺖ ‪  ،(HCV) c‬از ﻣﺸﮑﻼت ﻋﻤﺪه ﺑﻬﺪاﺷـﺖ ﺟﻬـﺎﻧﯽ‬ ‫اﺳﺖ. وﻟﯽ ﻫﻨﻮز واﮐﺴﻦ ﺗﺎﯾﯿﺪ ﺷﺪه ﻋﻠﯿﻪ ‪  HCV‬وﺟﻮد ﻧﺪارد. ﻣﺸﺨﺺ ﺷﺪه اﺳﺖ ﮐـﻪ ﭘﺎﺳـﺦﻫـﺎی اﯾﻤﻨـﯽ ﺳـﻠﻮﻟﯽ، ﺑـﻪ‬ ‫ﺧﺼﻮص ﭘﺎﺳﺦﻫﺎی ‪ CTL‬ ﻧﻘﺶ وﯾﮋهای در درﻣﺎن ﻋﻔﻮﻧﺖ ﺑﺎ اﯾﻦ وﯾﺮوس دارﻧﺪ. ﻧﻈﺮ ﺑﻪ اﯾﻨﮑﻪ واﮐﺴﻦ ‪ BCG‬ ﺗﻮاﻧﺎﯾﯽ‬ ‫ﺗﺤﺮﯾﮏ ﭘﺎﺳﺦ اﯾﻤﻨﯽ ﺳﻠﻮﻟﯽ را ﺑﺨﻮﺑﯽ دارد، ﻟﺬا در ﺗﺤﻘﯿﻖ ﺣﺎﺿﺮ ﺗﻼش ﺑﺮ اﯾﻦ ﺑﻮد ﮐﻪ ﺑﺎ ﺳﺎﺧﺖ ﮐﺎﻧﺪﯾـﺪای واﮐﺴﻦ‬ ‫‪ BCG‬ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ (‪ (recombinant BCG=rBCG‬ﺗﺮﺷﺢ ﮐﻨﻨﺪه اﭘﯽ ﺗﻮپﻫﺎی اﯾﻤﻨﻮداﻣﯿﻨﻨﺖ ‪ HCV‬ ﭘﺎﺳﺦ اﯾﻤﻨﯽ ﻣﻨﺎﺳـﺐ‬ ‫ﻋﻠﯿﻪ آﻧﻬﺎ اﯾﺠﺎد ﺷﻮد.‬ ‫روش ﺑﺮرﺳﯽ: ﻗﻄﻌﺎت ژﻧﯽ ‪  HBsAg‬و ﭘﻨﺞ اﭘﯽ ﺗﻮپ ﻏﺎﻟﺐ ﺷﺎﻣﻞ core132-142 , E2405-414 , E2614-622 , NS31406-1415 and core39-48 ‬ﺑﻪ ﻗﻄﻌﻪ ژﻧﯽ ﺣﺎوی ﭘﺮوﻣﻮﺗﺮ  Hsp60‬و ‪  antigen signal sequence‬از ﻃﺮﯾﻖ ‪SOEing PCR‬‬ ‫ﻣﺘﺼﻞ، وﺗﮑﺜﯿﺮ ﺷﺪﻧﺪ. ﺳﭙﺲ ﻗﻄﻌﺎت ﺳﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪه ﺷﺎﻣﻞ ﺗﺮادف ‪ HSP-S-HPOL‬در ﺷﺎﺗﻞ وﮐﺘﻮر  ‪  pVN2‬ﮐﻠﻮن‬ ‫ﺷﺪ. ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ ﻧﻬﺎﯾﯽ(‪ (pHSP-alpha-S-HPOL‬ﺑﺎ روش اﻟﮑﺘﺮوﭘﻮرﯾﺸﻦ وارد ‪  BCG‬ﮔﺮدﯾﺪ. ‪  BCG‬ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ در ﻣﺤﯿﻂ‬ ‫ﮐﺸﺖ ﻟﻮﻧﺸﺘﺎﯾﻦ ﺟﺎﻧﺴﻮن ﺣﺎوی ﮐﺎﻧﺎﻣﺎﯾﺴﯿﻦ اﻧﮑﻮﺑﻪ ﺷﺪ.‬ ‫ﯾﺎﻓﺘﻪ ﻫﺎ: ﺳﺎزه ﻧﻬﺎﯾﯽ از ﻃﺮﯾﻖ ﻫﻀﻢ آﻧﺰﯾﻤﯽ و ﺗﻌﯿﯿﻦ ﺗﻮاﻟﯽ ﺗﺎﯾﯿﺪ ﺷﺪ. ﭘﺲ از ﮔﺬﺷﺖ 4 ﻫﻔﺘﻪ، ﮐﻠﻨﯽ ﻫﺎی ﻧﺨﻮدی رﻧﮓ‬ ‫وﻣﻘﺎوم ﺑﻪ ﮐﺎﻧﺎﻣﺎﯾﺴﯿﻦ ‪ BCG‬ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ در ﺳﻄﺢ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﻟﻮﻧﺸﺘﺎﯾﻦ ﺟﺎﻧﺴﻮن ﻧﻤﺎﯾﺎن ﺷﺪﻧﺪ. ﺗﺎﯾﯿﺪ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ در‬ ‫‪  BCG‬ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﺣﺎﺻﻞ ﺣﺎﮐﯽ از ﻣﻮﻓﻘﯿﺖ آﻣﯿﺰ ﺑﻮدن اﻟﮑﺘﺮوﭘﻮرﯾﺸﻦ ﺑﻮد.‬ ‫ﻧﺘﯿﺠﻪﮔﯿﺮی: ﻧﺘﺎﯾﺞ ﻧﺸﺎن داد ﮐﻪ اﻣﮑﺎن ﺳﺎﺧﺖ ‪  rBCG‬ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ ﭘﺲ از ﺳﺎﺧﺖ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ ﻧﻬﺎﯾﯽ ‪pHSP-S-HPOL‬‬ ‫و ﺗﺮاﻧﺴﻔﮑﺖ آن ﺑﻪ ‪ BCG‬ وﺟﻮد دارد. ﮐﻠﻨﯽﻫﺎی ‪  rBCG‬از ﻧﻈﺮ اﻣﮑﺎن ﺗﺮﺷﺢ ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﻣﻮرد ﻧﻈﺮ ﻗﺎﺑﻞ ‫ﺑﺮرﺳﯽ ﻣﯽﺑﺎﺷﻨﺪ.‬